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GST沉降试验文献资料
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新型雌激素受体β信号通路调节因子的分离及鉴定
目的:利用酵母双杂交技术筛选与ERβ相互作用的蛋白,为进一步研究ERβ的功能奠定基础.方法:从乳腺cDNA文库中钓取ERβ-AF1 cDNA,构建诱饵蛋白载体pAS2-1-ERβ-AF1,利用酵母双杂交筛选技术,在乳腺cDNA文库中筛选与ERβ-AF1相互作用的蛋白.将含有pACT2-候选基因的酵母菌与含有pAS2-1-ERβ-AF1的酵母菌进行交配实验,利用LacZ报告基因检测ERβ-AF1与候选蛋白之间是否存在相互作用.然后将ERβ-AF1和候选蛋白分别构建到pGEX-KG和pET-28a上,并纯化GST-ERβ-AF1和His-候选蛋白融合蛋白,利用GST沉淀实验进一步验证ERβ-AF1和候选蛋白的体外相互作用.结果:所获取的候选蛋白为CTGF,是CCN 多肽家族成员.交配实验表明,CTGF与ERβ-AF1特异相互作用,而不与空载体或BRCT1对照相互作用.GST沉淀实验进一步验证,CTGF与ERβ、ERα均存在相互作用,但与CTGF同源性较高的NOV蛋白却不与ERβ、ERα结合.结论:CTGF和ERβ存在特异的相互作用.
关键词： 结缔组织生长因子(CTGF) 受体 雌激素 相互作用 GST沉降试验
