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AFM观察囊泡融合法形成支撑磷脂膜的微观形成过程
目的 利用原子力显微镜(AFM)观察支撑磷脂膜的微观形成过程.方法 冰浴超声法制备磷脂脂质体溶液,囊泡融合法形成人工磷脂双分子层,用AFM进行观察.结果 利用AFM观察到磷脂膜的微观形成过程为:脂质体囊泡吸附→脂质体囊泡之间发生黏着→脂双层之间形成接触点→磷脂囊泡破裂→形成磷脂分子层→磷脂分子层间流动进行融合形成大片磷脂膜.结论 AFM可观察磷脂膜的微观形成过程,进而为细胞膜和膜蛋白的功能研究提供基础.
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正电性多肽copoly(Lys/Tyr)与磷脂膜的相互作用研究
目的研究正电性多肽 copoly(Lys/Tyr)(CPLT) 在模拟生物膜上的透过性.方法①配制由卵磷脂(EPC)、2-油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)和大豆磷脂(SBPL)组成的二分子磷脂膜.②Zeta 电位测定法(zeta potential method,ZP)测定由上述磷脂组成的脂质体在加入CPLT后的膜表面Zeta 电位.③园二色谱法(circular dichroism spectroscopy,CD)检测CPLT分子与磷脂膜作用时的构象情况.④电生理学方法(electrophysiology technique,ET)测量CPLT分子在磷脂膜上引起的跨膜电流.⑤荧光光度分析法(fluorescence spectroscopy,FS)检测CPLT分子与磷脂膜的作用过程中的荧光强度变化.⑥共焦点激光扫描显微分析法(confocal laser scanning microscopy,CLSM)研究CPLT在磷脂膜上透过及其相对透过效率.结果①随着CPLT的加入和其浓度的增加,磷脂膜Zeta电位逐渐增加并趋向饱和.②CPLT分子在水相取β-sheet 构象,当与磷脂膜结合后,其β-sheet 构象的波峰发生红移,但构象基本不变.③CPLT分子能在一定浓度和一定外加电压条件下,透过二分子磷脂膜引起膜电流. ④CPLT与磷脂膜的作用可分为三步:第一步,CPLT分子吸附于磷脂膜上;第二步,CPLT分子通过磷脂膜的疏水区;第三步,CPLT分子从二分子膜的内膜解吸,进入膜内水相.⑤CPLT分子在磷脂膜上的透过效率主要决定于磷脂膜的组成,在磷脂膜中存在带负电性的磷脂时可降低CPLT分子在磷脂膜上的透过效率.⑥在初的CPLT分子与磷脂膜的相互吸附过程中,CPLT 分子与磷脂膜间的静电作用力起主要作用.结论 copoly(Lys/Tyr) 分子能透过二分子磷脂膜,其透过效率主要决定于磷脂膜的组成.在初的肽-膜吸附过程中,当存在静电作用力时,静电力起主要作用,疏水效应次之.
