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沉默TCF7L2对胰岛素抵抗HepG2细胞胰岛素降解酶表达的调控作用观察
目的 探讨沉默转录因子7类似物2(TCF7L2)对胰岛素抵抗(IR)HepG2细胞胰岛素降解酶(IDE)表达的调控作用及可能机制.方法 将HepG2细胞分为空白组、TCF7L2干扰组、空载体组、IR组、IR+TCF7L2干扰组、IR+空载体组.采用高浓度胰岛素(5×106mol/L)持续作用24h诱导IR模型(IR-HepG2细胞)生成.以人TCF7L2 mRNA编码序列为干扰靶点构建TCF7L2特异性小干扰RNA慢病毒载体(LV-TCF7L2-siRNA)转染空白组及IR组细胞,空载体病毒转染空载体组及IR+空载体组细胞.qRT-PCR法检测各组细胞TCF7L2及IDE mRNA的表达,Western blotting检测各组细胞TCF7L2、IDE、胰岛素刺激后蛋白激酶B(AKT)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达的变化,流式细胞术检测各组2-脱氧-D-葡萄糖(2-NBDG)荧光葡萄糖摄取率.结果 与空白组比较,IR组细胞葡萄糖消耗量及2-NBDG摄取率均明显降低(P＜0.01),证明IR细胞模型建立成功.qRT-PCR及Western blotting结果显示,IR组TCF7L2及IDE mRNA种蛋白表达水平均明显低于空白组(P＜0.05),TCF7L2干扰组TCF7L2、IDE mRNA和蛋白表达水平较空白组、空载体组明显下降,IR+TCF7L2干扰组TCF7L2、IDE mRNA和蛋白表达水平较IR组、IR+空载体组均明显下降(P＜0.05).生理剂量胰岛素刺激后,IR组、IR+TCF7L2干扰组p-AKT蛋白水平较空白组明显下降(P＜0.01),各组总AKT水平差异无统计学意义.TCF7L2干扰组2-NBDG荧光葡萄糖摄取率较空白组和空载体组明显下降,IR+TCF7L2干扰组2-NBDG荧光葡萄糖摄取率较IR组、IR+空载体组明显下降(P＜0.01).结论 TCF7L2联合IDE致肝细胞IR,其机制可能与减少胰岛素信号通路关键酶p-AKT蛋白的表达有关.
