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GATA-3在鼠前房相关免疫偏离形成中的作用
目的探讨GATA-3在前房相关免疫偏离(anterior chamber associated immune deviation,ACAID)形成中的作用.方法分别将视网膜光感受器间维生素A类结合蛋白(interphotoreceptor retinoid binding protein,IRBP)及其与完全弗氏佐剂混合液注入Wistar大鼠前房及鼠右后足垫内免疫动物,皮内注射IRBP观察迟发型超敏反应.分别于鼠前房内注射IRBP后的3、5、7、14和21 d及鼠右后足垫内注射IRBP和完全弗氏佐剂混合液后14 d时处死动物,取其脾脏,采用免疫组织化学方法行单、双染色,对转录因子GATA-3的阳性表达细胞行免疫组织化学染色及Western blot法检测,观察GATA-3在细胞中的表达水平.结果正常大鼠脾脏组织细胞中,有少量GATA-3表达,前房注射IRBP的第5、7、14及21 d GATA-3表达量显著增高(P＜0.01).表达GATA-3的细胞主要是CD+4 T淋巴细胞.结论 GATA-3表达的增加早于ACAID的形成时间(7 d),提示GATA-3参与了ACAID形成,它可能通过激活Th2细胞而发挥作用.
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类风湿关节炎患者Th亚群在其发病机制中的作用
目的:在单细胞水平上研究类风湿关节炎 (RA)患者滑液及外周血中 Th1/Th2细胞因子模式,探讨 Th亚群在 RA发病机制中的作用和意义. 方法:15例 RA患者的滑液单个核细胞 (SFMC)和外周血单个核细胞 (PBMC) 及 10例正常人的 PBMC用 PMA离子霉素和莫能菌素刺激培养 6 h,细胞内细胞因子免疫荧光双标染色后,用流式细胞仪检测 Th亚群. 结果:与 PBMC[Th1, Th2, Th0分别为( 8.1± 2.1)%,( 2.8± 1.0)%,( 1.8± 0.5)% ]相比, RA患者 SFMC中 Th1和 Th0的比例明显增高 [Th1( 29.2± 3.9)%, Th0( 4.0± 1.4)% ],而 Th2则明显降低 [(1.2± 0.6)% ]; RA患者和正常人 PBMC中, Th1,Th2,Th0差异均无显著性意义 [正常人 Th1, Th2, Th0分别为( 7.3± 2.2)%,( 3.4± 1.1)%,( 2.1± 0.8)% ]. 结论:RA患者关节内存在 Th亚群的不平衡, Th1和 Th0占明显优势, Th2则明显减少,恢复 Th1/Th2平衡对 RA的疾病进程和治疗将有重要意义.
关键词： 关节炎 类风湿 CD4阳性 T淋巴细胞 流式细胞术 -
RATG对CD4+细胞和CD8+细胞共刺激分子基因表达和细胞因子分泌的影响
目的 探讨兔抗人胸腺细胞多克隆抗体(RATG)在体外对CD4+细胞和CD8+细胞共刺激分子基因表达和细胞因子分泌的影响.方法 从正常成人外周血单个核细胞中分离和纯化CD4+细胞和CD8+细胞,加入RATG,37℃下培养.分别于24、48和72 h收集培养上清液和细胞,以不处理的细胞为正常对照,正常兔Ig处理的细胞作为阴性对照.采用实时聚合酶链反应技术检测培养细胞的细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA4)、CD154、Foxp3、OX40、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)、IL-10和IL-2受体(CD25)的基因表达水平,应用Multiplex检测技术测定培养上清液中IFIN-γ、IL-2、IL_4和IL-10的水平.结果 与正常CD4+细胞比较,加入RATG的CD4+细胞培养24 h,其CTLA-4、CD154、Foxp3、OX40、IFN-γ、IL-2、IL-10和CD25基因转录表达均上调,阴性对照CD4+细胞则无这些基因转录表达的上调.处理48 h后,CD4+细胞的CD154和IL-2的基因转录表达呈现下调现象,而CTLA4、Foxp3、0X40、IFN-γ、IL-10和CD25的基因转录水平均较24 h时明显降低.处理72 h后,CD4+细胞的CTLA4、Foxp3、OX40和CD25的基因转录表达再次呈现高水平,CD154和IFN-γ的基因转录表达上调表达不明显,而IL-2和IL-10的基因转录表达则呈现明显的下调.RATG处理的CD4+细胞培养上清液中的IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10浓度显著增加,以处理24 h的水平高,而阴性对照者未测出.与正常CD8+细胞相比较,加入RATG处理的CD8+细胞培养24 h,其CTLA4、Foxp3、OX40、IFN-γ,、IL-2、IL-10和CD25的基因转录表达呈现明显上调,而CD154基因转录表达稍有下调.RATG处理48 h,CD8+细胞的CTLA4、Foxp3、OX40、IFN-γ和CD25基因转录表达仍维持在高水平,CD154基因转录表达仅仅呈现低水平的上调,IL-10基因转录表达水平显著下降,而IL-2的基因转录表达则明显下调.处理72 h,CD8+细胞的CTLA4、Foxp3、OX40、IFN-γ、IL-10和CD25的基因转录表达仍维持在高水平,CD154基因转录表达则呈现下调,而IL-2基因转录表达的下调更为显著.阴性对照CD8+细胞则未呈现这些基因转录的上调现象.RATG处理的CD8+细胞培养上清液中IFN-γ、IL-2和IL-10显著增多,以处理24 h的浓度高,IL-4浓度升高的幅度较小,而正常CD8+细胞和阴性对照CD8+细胞几乎检测不到IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10.结论 在体外,RATG可以刺激CD4+细胞和CD8+细胞上调多种促进免疫抑制的共刺激分子基因表达,促进其分泌与免疫调节相关的IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10.
