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含甲氨蝶呤的肿瘤源性微粒联合放疗体外对肺腺癌干细胞增殖的影响
目的：探讨肿瘤微粒包装的甲氨蝶呤（T-MP MTX）联合放疗体外对肺腺癌干细胞增殖的影响。方法制备非小细胞肺癌A549细胞来源的T-MP MTX。MTT法检测不同浓度T-MP MTX作用的A549、H460细胞及支气管上皮细胞株16HBE细胞增殖变化；流式细胞术检测空白组、T-MP MTX组A549细胞周期；肿瘤球形成实验和动物实验检测空白组、T-MP MTX组（对照组）及T-MP MTX联合放疗组（2 Gy组、4 Gy组、6 Gy组）肿瘤干细胞增殖情况；Western blot检测肿瘤干性相关基因β-catenin、Nanog、SOX-2、KLF4等表达变化。结果四甲基偶氮唑盐（MTT）检测结果显示，T-MP MTX呈浓度依赖性地抑制A549细胞增殖，对H460细胞及16HBE细胞增殖无明显抑制作用。流式细胞仪检测结果显示，空白组和T-MP MTX组中S期细胞比例分别为（15.83±3.14）%和（47.47±6.69）%，T-MP MTX组较空白组明显增高（t＝7.411，P＝0.002）。肿瘤球实验结果发现，空白组、对照组、2 Gy组、4 Gy组、6 Gy组肿瘤球的数量分别为（268.9±22.4）、（172.4±18.7）、（48.3±5.1）、（16.3±3.5）、（5.1±3.1）个，组间差异有统计学意义（F＝228.291，P＝0.000）；与空白组比较，对照组、2 Gy组、4 Gy组、6 Gy组肿瘤球的数量均减少，差异均有统计学意义（均P＜0.05）；与对照组比较，2 Gy组、4 Gy组、6 Gy组肿瘤球数减少（均P＜0.05），且随放疗剂量增高，减少幅度增大（F＝95.142，P＝0.000）。肿瘤球体积分析结果与肿瘤球数量对比结果相似。Western blot检测结果显示，T-MP MTX单独处理A549细胞后β-catenin、KLF4、Nanog、SOX-2等肿瘤干细胞相关基因表达水平有所下降，而T-MP MTX联合放疗处理后明显加强这种抑制作用。动物实验结果显示T-MP MTX组移植瘤荧光素酶活性较空白组下降（P＝0.000），而T-MP MTX+2 Gy组移植瘤荧光值下降更为明显（t＝6.887，P＝0.002）。结论T-MP MTX可能具有较高的放疗增敏作用，与放疗联合能协同抑制肺腺癌干细胞增殖，其机制可能与激活低代谢状态的肿瘤干细胞和阻断细胞周期进程有关。
