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射线联合嵌合启动子介导的自杀基因对肿瘤细胞的靶向杀伤作用
目的 探讨放射线联合新型嵌合启动子介导辣根过氧化物酶/吲哚乙酸(HRP/IAA)自杀基因系统特异高效的抗肿瘤作用.方法 构建含有4个串联放射反应元件CArG、含或不含巨细胞病毒(CMV)启动子的人端粒酶逆转录酶嵌合启动子,筛选肿瘤特异性及放射诱导性强的嵌合启动子,下游连接自杀基因辣根过氧化物酶(HRP),检测放射线联合基因治疗对肿瘤细胞HeLa、A549和MHCC97增殖及凋亡的影响.结果 人胚肺成纤维细胞MRC-5中C4-hTC嵌合启动子的活性(0.1±0.0)明显低于肿瘤细胞株HeLa、A549和MHCC97(0.6±0.0、1.1±0.1和1.0±0.1,P＜0.01),经过6 Gy射线诱导后,这种差异更加显著(活性分别为0.2±0.1、1.7±0.2、2.3±0.2和2.3±0.1,P＜0.01).在肿瘤细胞株HeLa、A549和MHCC97中,嵌合启动子C4-hTC-HRP携带的自杀基因系统SER值分别为2.64、2.75和2.82,显著高于单纯hTERT启动子.在肿瘤细胞中,除阴性对照质粒pGL3-control-Luc外,自杀基因与放射治疗相联合对肿瘤细胞的生长抑制明显高于单一治疗方法,而联合组中pC4-hTC-HRP/IAA系统与放射联合的生长抑制作用显著,对HeLa、A549和MHCC97细胞的生长抑制率分别为67.3%、69.0%和64.6%.在肿瘤细胞中,除阴性对照质粒pGL3-control-Luc外,联合组诱导的早期凋亡率明显高于单一治疗方法组,其中pC4-hTC-HRP/IAA系统与放射联合诱导的凋亡率高,HeLa、A549和MHCC97细胞凋亡率分别为39.6%、33.0%和33.2%.结论 新型嵌合启动子C4-hTC具有良好的肿瘤特异性及放射诱导性,放射线联合基因治疗对肿瘤细胞具有特异高效的杀伤作用,在肿瘤的基因放疗中具有较强的应用潜力.
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Egr-1调控元件启动的造血因子基因转移对辐射损伤的骨髓基质细胞的保护作用
目的观察基因修饰的骨髓基质细胞对辐射的耐受作用.方法通过辐射对CFU-F形成的影响制作细胞存活曲线分析造血因子双顺反子基因修饰的基质细胞(HFCL/FG和HFCL/EFG)对辐射的耐受,采用3H-TdR掺入法验证上述结果,观察转染细胞对粒系祖细胞生长的影响.结果 HFCL/FG和HFCL/EFG细胞生存曲线的肩明显增宽,D0值增大,N和Dq值增大,3H-TdR掺入实验也验证了该结果.这种细胞对粒系祖细胞的扩增作用明显增强.结论造血因子基因修饰的骨髓基质细胞具有抗辐射和支持造血作用.
