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转染beclin 1基因诱导自噬对三阴性乳腺癌BT-549细胞生长的影响
目的 探讨转染beclin 1基因诱导三阴性乳腺癌BT-549细胞发生自噬及其对细胞生长的影响.方法 将BT-549细胞分为4组,包括空白组、空载体组、脂质体组和目的基因组,并以MDA-MB-231细胞作为阳性对照组.采用LipofectamineTM 2000携带含有beclin 1基因的质粒转染BT-549细胞,分别于转染后24、36、48、60 h用荧光显微镜观察转染效率;于转染后48 h利用RT-PCR检测各组细胞beclin 1 mRNA表达情况;转染后各组细胞分别在含10％胎牛血清1640培养基和无胎牛血清1640培养基内培养,并分别于24、48、72、96 h和12、24、36、48 h采用MTT法检测细胞的增殖率和存活率;各组细胞在无胎牛血清1640培养基内培养24 h后,采用流式细胞仪检测其细胞凋亡和细胞周期情况;各组细胞在无胎牛血清1640培养基内生长36 h后,经吖啶橙染色观察并比较发生自噬的细胞数.MTT数据按重复测量的方差分析进行统计,其余计量资料按单因素方差分析进行统计,计数资料按照R×C表资料的x2检验进行统计分析.结果 48 h时携带目的基因的质粒经脂质体转染BT-549细胞的效率高;目的基因组细胞beclin 1 mRNR水平显著高于空白组、脂质体组、空载体组和阳性对照组(P＜0.01);在含10％胎牛血清1640培养基内,目的基因组细胞的增殖率显著低于空白组(F=112.1,P=0.00),而在无胎牛血清1640培养基内,目的基因组细胞36 h和48 h的存活率显著高于空白组(F=37.5,P=0.00);目的基因组细胞的凋亡比例增加(F=3914.4,P=0.00),且细胞处于Go/Gi期的比例升高(F=258.8,P=0.00);目的基因组细胞发生自噬的数量显著增加(x2=7.7,P=0.00).结论 向三阴性乳腺癌BT-549细胞转染beclin 1基因,可提高细胞的自噬水平.该作用可抑制细胞在正常培养环境下的增殖,但对低营养环境下的细胞存活具有保护作用.
关键词： 乳腺肿瘤 beclin 1 基因 自噬
