首页 > 文献资料
-
适用于提取新生隐球酵母菌及白色假丝酵母菌总核糖核酸快速方法研究
目的 探讨快速可以兼顾提取高质量的新生隐球酵母菌和白色假丝酵母菌总核糖核酸(RNA)的试验方法,为各种功能基因的表达研究奠定基础.方法 针对新生隐球酵母菌荚膜株和荚膜缺陷株新生隐球酵母菌H99及白色假丝酵母菌国际标准菌株ATCC 64548采用冷酸洗玻璃珠联合Yeast RNA kit法提取总核糖核酸(RNA),用紫外线分光光度计测量其OD260、OD280的值,并且进行琼脂糖凝胶电泳,同时应用RT-PCR鉴定RNA质量.结果 提取的新生隐球酵母菌荚膜株和荚膜缺陷株总RNA产量分别为0.6μg/107细胞、1.5 μg/107细胞,且OD260/OD280比值在1.8～2.0,电泳显示提取的总RNA呈现28S rRNA,18S rRNA和5s rRNA 3条清晰的条带；提取的白色假丝酵母和菌丝相总RNA产量分别为2.3 μg/107细胞、3.1 μg/107细胞,且OD260/OD280比值在1.8～2.0,电泳显示提取的总RNA呈现28S rRNA、18S rRNA和5S rRNA 3条清晰的条带.结论 冷酸洗玻璃珠联合Yeast RNA kit法,快速高质量适用于大小样本的新生隐球酵母菌和白色假丝酵母菌总RNA提取,满足各种类型分子生物学研究需要以及临床鉴别诊断治疗不同种类真菌感染.
-
缺氧诱导因子1α异常表达与肝细胞癌发展及预后的关系
目的 分析肝细胞癌(HCC)组织及癌周组织中总RNA和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达及其病理学特征.方法 以自身配对法收集经手术切除患者的HCC及其癌周组织,从组织中抽提总RNA并分析其浓度;以免疫组化染色法检测HCC及其癌周组织HIF-1α表达、胞内分布及病理学特征.结果 肝组织中总RNA浓度,癌周组织显著高于癌灶组织(P＜0.01);HCC及癌周组织中HIF-1α阳性表达呈棕黄色,颗粒状,主要定位于胞浆中,部分位于胞核.癌周组织HIF-1α呈均匀表达,癌周组织表达强于癌灶组织,中央静脉周围表达明显.HIF-1α表达阳性率:癌周组织为80.0%,癌周组织为100.0%,差异有统计学意义(P＜0.01).临床病理学特征分析发现,癌周组织HIF-1α表达率与肿瘤大小相关,其表达强度与分化程度负相关,与HBV感染、肿瘤数目无关.结论 HCC组织核酸代谢旺盛和HIF-la过表达,与HCC的发展和预后密切相关.
-
人肝癌组织GGT异常表达与逆转录巢式PCR分析
为探讨肝癌组织中γ-谷氨酰转肽酶(GGT)的表达与改变,将自身配对的肝癌、癌周及远癌组织总RNA纯化,分析不同分子形式GGT表达,并以逆转录巢式PCR(RT-PCR)扩增GGT5-末端非编码区基因.结果:肝癌、癌周和远癌组总RNA浓度呈明显的梯度升高趋势(P＜0.05);肝癌组总GGT比活性和不同分子形式GGT均明显高于癌周和远癌组(P＜0.05);RT-PCR扩增GGT基因片段,在肝癌、癌周和远癌组阳性率分别为95.8%、87.5%和79.2%.提示肝癌组织中GGT呈异常表达,GGT基因分析可望成为监测肝细胞癌变的灵敏方法.
关键词： 肝癌 γ-谷氨酰转肽酶基因 表达 总核糖核酸 逆转录巢式多聚酶链反应
