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乙型肝炎病毒X蛋白对DNA甲基转移酶3A/3B表达的影响
目的 观察乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对QSG7701细胞中DNA甲基转移酶(DNMT)3A/3B表达的影响.方法 本研究室前期构建好的重组表达质粒pcDNA-X及空载体pcDNA3.0分别转染QSG7701细胞,经含G418的选择性培养基筛选获得稳定转染HBV-X基因的细胞克隆(pcDNA-X/QSG7701)及稳定转染空载体pcDNA3.0的细胞克隆(pcDNA3.0/QSG7701).采用RT-PCR、Western blot分别检测转染细胞中HBx mRNA和HBx蛋白的表达.Real-time PCR检测3种细胞DNMT3A/3B mRNA的表达情况.免疫组织化学法检测3种细胞DNMT3A/3B蛋白的表达情况.结果 RT-PCR、Western blot 检测结果显示pcDNA-X/QSG7701细胞中有HBx mRNA及HBx蛋白的表达.Real-time PCR结果显示pcDNA-X/QSG7701中DNMT3A/3B mRNA表达水平显著高于pcDNA3.0/QSG7701及未转染的细胞QSG7701(P< 0.05).免疫组织化学检测结果显示pcDNA-X/QSG7701细胞中DNMT3A/3B 蛋白表达水平显著高于pcDNA3.0/QSG7701及QSG7701细胞(P< 0.05).结论 稳定转染HBV-X基因的人源性永生化非瘤性肝细胞QSG7701中DNMT3A/3B mRNA和蛋白的表达水平均显著升高,提示HBV-X基因在mRNA及蛋白水平能上调转染细胞中DNMT3A/3B的表达,而细胞中DNMT3A/3B表达的增加是否一步影响癌基因、抑癌基因的表达水平,从而导致细胞癌变,尚有待进一步研究.
关键词： 乙型肝炎病毒X蛋白 乙型肝炎病毒 癌 肝细胞 DNA甲基化转移酶3A/3B
