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肝炎病毒X抗原文献资料
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乙型肝炎病毒X抗原结合蛋白1的原核表达及亚细胞定位
目的 应用酵母双杂交及生物信息学技术筛选乙型肝炎病毒X抗原结合蛋白1(HBXBP1)并进行克隆,探讨其在大肠埃希菌BL21中表达及亚细胞定位.方法 应用反转录PCR(RT-PCR)技术,以HepG2细胞mRNA为模板,扩增获得HBXBP1基因片段,连接到pGEM-T载体,双酶切鉴定及测序正确后克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,转化大肠埃希菌BL21,通过IPTG诱导表达以获得HBXBP1融合蛋白,并经SDS-PAGE及Western blot分析证实融合蛋白的特异性;构建HBXBP1基因的绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-C1-HBXBP1,转染HepG2细胞,24 h后于荧光显微镜下观察表达蛋白的亚细胞定位.结果 RT-PCR扩增获得921 bp的HBXBP1基因片段,插入原核表达载体pET-32a(+)中,转化大肠埃希菌BL21,经IPTG诱导成功获得约56 kD的重组蛋白,经Western blot分析证实其具有良好的特异性;成功构建HBXBP1基因的绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-C1-HBXBP1,其表达蛋白定位于细胞质.结论 pET-32a(+)-HBXBP1原核表达载体在大肠埃希菌BL21中诱导表达HBXBP1融合蛋白;HBXBP1基因可表达HBXBP1蛋白且定位于细胞质,为研究HBXBP1蛋白的免疫原性和生物学特性奠定了一定的理论基础.
