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叉头状转录因子O1对游离脂肪酸诱导的人肝癌细胞株HepG-2胰岛素抵抗和脂质堆积作用的研究
目的 研究叉头状转录因子O1(FoxO1)对游离脂肪酸介导的人肝癌细胞株(HepG-2)胰岛素抵抗和脂质堆积的作用以及对固醇调节元件结合蛋白-1c( SREBP-1c) mRNA和蛋白表达的影响.方法 将HepG-2细胞培养后用普通培养基培养为对照组,用含5.0×10-4 mol/L软脂酸的培养基诱导为软脂酸组,诱导后转染空白质粒为空白质粒组,诱导后转染FoxO1 siRNA质粒载体为FoxO1 siRNA载体组.运用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测FoxO1 mRNA表达,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,葡萄糖氧化酶法检测培养基中葡萄糖消耗量,油红O染色观察细胞脂质堆积；RT-PCR和Western blot技术分别检测SREBP-1c mRNA表达量以及蛋白的表达量.各组间均值比较采用单因素方差分析,样本间比较采用t检验.结果 软脂酸组较对照组细胞葡萄糖消耗量减少(1.17±0.56 vs 4.31±0.21,t=10.587,P＜0.01)、细胞中的脂质堆积增多、FoxO1 mRNA升高(0.78±0.10 vs0.51±0.12,t =3.629,P ＜0.05)、SREBP-1c mRNA升高(0.71±0.17 vs 0.25±0.08,t =6.290,P＜0.05)、SREBP-1c蛋白升高(0.69±0.10 vs0.41±0.07,t=4.797,P＜0.01).转染FoxO1siRNA质粒载体后葡萄糖消耗量较软脂酸组增加(2.26±0.41 vs 1.17±0.56,t =3.144,P＜0.05),FoxO1 mRNA、SREBP-1c mRNA、SREBP-1c蛋白的表达较软脂酸组均减少且接近于对照组(分别为0.38±0.06 vs 0.78±0.10,t=7.164,P＜0.01;0.45 ±0.13 vs 0.71 ±0.17,t =2.479,P＜0.05;0.41 ±0.06 vs 0.69±0.10,=4.797,P ＜0.01),细胞中的脂质堆积也较软脂酸组减少.结论 抑制FoxO1的表达,可改善游离脂肪酸诱导的细胞胰岛素抵抗、减少肝脏细胞内脂肪变性,其机制可能是通过下调SREBP-1c的表达.
关键词： 叉头转录因子类 游离脂肪酸 固醇调节元件结合蛋白质1
