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胰淀素对高糖刺激下大鼠胰岛细胞瘤细胞系Ins-1ATP敏感性钾通道的影响
目的 观察胰淀素短时间作用对高糖刺激的大鼠胰岛细胞瘤细胞系Ins-1的ATP敏感性钾通道(KATP通道)的影响.方法 以Ins-1细胞为研究对象,随机分为16.7 mmol/L葡萄糖处理组及0.1、1、10 μmol/L胰淀素预处理组,采用全细胞膜片钳技术分析不同浓度胰淀素短时间作用对高糖刺激下Ins-1细胞KATP通道电生理学特性的影响,同时收集细胞培养上清液应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定孵育液中的胰岛素含量.组间数据比较采用t检验.结果 与16.7 mmol/L葡萄糖组相比,0.1 μmol/L胰淀素预处理组胰岛素释放量及KATP通道半数激活电压(V0.5)差异均无统计学意义[分别为(5.57±0.93)比(4.95 ±0.49) μg/L和(9.4±1.4)比(13.0±2.4)mV,t=1.022、-2.244,均P＞0.05];而1 μmol/L及10 μmol/L胰淀素预处理组胰岛素释放量分别显著下降为(3.44±0.32)和(2.23±0.55)μg/L(t=3.751、5.354,均P＜0.05),而V0.5则分别显著提高到(28.2±2.7)和(33.3±2.1)mV(t=-5.053、-10.707,均P＜0.05).结论 高浓度胰淀素短时间作用可通过抑制高糖对KATP通道的关闭作用进而抑制Ins-1细胞胰岛素分泌.
关键词： 胰淀素 大鼠胰岛细胞瘤细胞系Ins-1 ATP敏感性钾通道 -
间歇性高糖对大鼠胰岛细胞瘤细胞系Ins-1的损伤作用及对第10号染色体缺失的张力同源性磷酸酶表达的影响
目的 探讨间歇性高糖对大鼠胰岛细胞瘤细胞系Ins-1的损伤作用及对第10号染色体缺失的张力同源性磷酸酶(PTEN)表达的影响.方法 将Ins-1细胞分为正常组(CG组,11.1 mmol/L葡萄糖培养)、持续高糖组(SHG组,33.3 mmol/L葡萄糖培养)、间歇性高糖组(IHG组,11.1 mmol/L及33.3 mmol/L葡萄糖交替培养12h),3组细胞均培养3d.欧文比色法(MTS)测定细胞增殖活性,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V/PI)双染细胞后,以流式细胞仪测定各组细胞的凋亡率,放免法测各组细胞胰岛素分泌,2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针测定各组细胞内活性氧簇(ROS)水平,倒置相差显微镜下观察各组细胞形态,钙离子荧光探针法(Fluo 3-AM)测定细胞内钙离子浓度,Western blotting法测定各组细胞PTEN蛋白表达.各组内均数比较采用单因素方差分析.结果 SHG组细胞凋亡率、细胞内ROS水平、细胞内钙离子浓度及PTEN表达均较CG组显著增加(t=8.310、10.261、17.890、5.123,均P＜0.05),细胞增殖活性、胰岛素分泌均较CG组显著降低(t=-19.630、-2.053,均P＜0.05).IHG组细胞凋亡率、细胞内ROS水平以及钙离子浓度及PTEN表达均较CG组及SHG显著增加(t=6.200～18.227,均P＜0.05),细胞增殖活性、胰岛素分泌均较CG组及SHG组均显著降低(t=-27.800、-2.790、-8.167、-1.503,均P＜0.05).IHG组较SHG组及CG组Ins-1细胞异型性明显、细胞数量显著减少且排列紊乱.结论 氧化应激参与高糖对Ins-1细胞的损伤作用,可能与PTEN表达增高有关,间歇性高糖对INS-1细胞的损伤作用较持续性高糖严重.
