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肺泡微石症患者磷酸钠协同转运蛋白基因的检测及其变异
目的 检测3例肺泡微石症患者的磷酸钠协同转运蛋白基因(SLC34A2)基因变异情况,探讨该基因对人肺泡上皮细胞A549系(简称A549细胞)中钙、磷转运的影响.方法 采用分段PCR和基因测序的方法对3例肺泡微石症患者的SLC34A2基因进行检测,用Trizol法从新鲜肺组织中获得RNA,逆转录-PCR调取目的 基因,构建该基因真核表达载体,质脂体方法转染A549细胞,逆转录-PCR检测SLC34A2 mRNA的表达,检测细胞上清液中钙、磷含量.细胞实验分为转染组(5×105/孔,4孔)、对照组(5×105/孔,1孔)和空白组(5×105/孔,1孔),实验重复6次.计量资料采用单因素方差分析,多组问两两比较采用SNK-q检验.结果 3例肺泡微石症患者中未发现变异的外显子.获得完整的SLC34A2 cDNA,成功构建peDNA3.1(+)-SLC34A2真核表达载体,并转染A549细胞.转染组SLC34A2 mRNA的吸光度值(2.48.±0.45)明显高于对照组(0.55±0.07)和空白组(0.60±0.06),差异均有统计学意义(q值分别为16.25和15.78,均P＜0.01);转染组细胞上清液中钙、磷含量[(0.110±0.016)mmol/L和(3.8±0.4)mmol/L]明显低于对照组[(0.254±0.047)mmol/L和(7.3±0.8)mmol/L]和空白组[(0.262±0.041)mmoL/L和(7.1±0.4)mmol/L],差异均有统计学意义(q值为8.657～13.892,均P＜0.01).结论 随着SLC34A2基因的表达量增加,细胞外液钙、磷含量随之下降.SLC34A2的变异可能未发生在基因组水平.
关键词： 钠-磷协同转运蛋白质类 基因 肺泡微石症
