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人锌指蛋白23在原发性肝细胞肝癌中的表达及临床意义
目的 分析hZNF23在人HCC组织及HepG2细胞系中的表达情况,以探讨其与HCC临床病理特征和细胞凋亡的关系.方法 采用实时荧光定量RT-PCR法检测37例HCC患者(按Edmondson分为两组,Ⅰ+Ⅱ级17例,Ⅲ+Ⅳ级20例;按临床分为3组,HCC合并肝硬化和HBV感染组31例,HCC合并肝硬化和HCC合并HRV感染组各3例)癌组织和其癌旁肝组织标本中hZNF23及内参GAPDH mRNA的表达水平,并分析其与HCC临床病理特征的关系;体外培养HepG2细胞后,分为4组(对照组、1.25、2.5和5 μg/ml顺铂组)或6组(对照组、1.25、2.5、5、10和20μg/ml顺铂组).采用四唑盐比色法(MTT)和流式细胞仪膜联蛋白V/碘化丙啶染色法检测与观察HepG2细胞的增殖及凋亡情况;实时荧光定量RT-PCR法检测HepG2细胞在不同浓度的顺铂诱导凋亡后,hZNF23及内参GAPDH mRNA的表达水平.结果 37例HCC患者癌组织及其癌旁组织标本中hZNF23相对表达量分别为8.84(3.59～15.05)和22.20(13.85～42.90),差异有统计学意义(U=259.5,P＜0.01).Edmondson Ⅰ+Ⅱ级HCC组织hZNF23 mRNA相对表达量为12.80(4.80～19.50),高于Ⅲ+Ⅳ级的5.01(2.88～11.68),且差异有统计学意义(U=99.00,P＜0.05);合并肝硬化组为9.92(3.80～15.25),未合并肝硬化组为3.21(2.78～3.60)、合并HBV感染组为9.09(3.72～15.25),无HBV感染组为2.48(1.79～12.10),合并肝硬化组与未合并肝硬化组、合并HBV感染组与未合并HBV感染组比较,其hZNF23 mRNA表达量差异均无统计学意义(U值分别为16.00和24.00,P均＞0.05).顺铂作用于HepG2细胞24 h后,用MTT检测,顺铂明显抑制HepG2细胞增殖;膜联蛋白V/碘化丙啶染色法检测细胞凋亡率依次为(0.9±0.2)%、(4.2±0.3)%、(9.8±4.3)%、(23.0±6.0)%,顺铂显著诱导HepG2细胞凋亡,且呈剂量依赖性(F=27.890,P＜0.01).实时荧光定量RT-PCR法检测1.25、2.5、5μg顺铂诱导的HepGR细胞组hZNF23 mRNA相对表达量依次为(10.39±3.08)×10-5、(24.10±2.09)×10-5、(6.90±2.24)×10-4,均显著高于对照组[(9.48±1.80)×10-5,F=6.027,P＜0.01].结论 HCC组织中hZNF23相对表达水平与Edmondson分级密切关联;顺铂对HepG2细胞的凋亡作用可能与hZNF23上调有关.
