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经典的Wnt信号通路在大鼠肝脏卵圆细胞增殖和分化中的作用
目的 探讨激活经典的Wnt信号转导通路在大鼠肝脏卵圆细胞增殖、分化中的作用.方法 不同浓度的重组Wnt3a纯化蛋白(20,40,80,160,200 ng/ml)在无血清培养条件下作用WB-F344细胞24 h,Brdu掺入法检测细胞增殖情况.160 ng/ml重组Wnt3a纯化蛋白在无血清条件下作用WB-F344细胞,作用24 h后通过免疫荧光观察β-catenin亚细胞定位的变化,Western-blot观察β-catenin蛋白表达的变化;半定量RT-PCR观察下游靶基因CyclinDl mRNA表达的变化.作用72 h后通过RT-PCR观察CK-19,AFP,ALB,HNF-6,HNF-4αmRNA表达的变化,Western-blot观察CK-19,AFP蛋白表达的变化.以同期未做处理的WB-F344细胞作为空白对照.结果 不同浓度的重组Wnt3a纯化蛋白作用后,处理组WB-F344细胞以剂量依赖方式增殖,Wnt3a处理组明显高于空白对照组(P<0.05),160 ng/ml作用时,增殖达到高峰.Wnt3a(160 ng/m1)作用24 h后,通过免疫荧光共聚焦观察β-catenin的亚细胞定位发现,处理组β-catenin在WB-F344主要在细胞核中表达;而未处理组主要在核周表达;Western-blot发现处理组β-catenin蛋白表达轻度增加;半定量RT-PCR发现下游靶基因CyclinDl mRNA的表达显著增加(P<0.01).72 h后,RT-PCR发现两组中均有AFP,CK-19,HNF-6,HNF4-α基因表达,而ALB在两组中均不表达;同时通过Western-blot发现AFP,CK-19蛋白在两组中均有表达.结论 激活经典的Wnt信号转导通路促进大鼠肝脏卵圆细胞系WB-F344的增殖和自我更新.
关键词： 经典的Wnt信号通路 卵圆细胞 增殖 自我更新
