首页 > 文献资料
-
KIR2DL4在NK-92细胞上的超表达及其功能分析
目的克隆KIR2DL4 cDNA,并使其在NK-92细胞上获得稳定表达,分析KIR2DL4分子对NK-92细胞功能的调节作用. 方法采用RT-PCR方法,从人蜕膜单个核细胞扩增出KIR2DL4 cDNA,将目的基因亚克隆于逆转录病毒表达载体构建成KIR2DL4-pLNCX 表达载体,将重组质粒转入NK-92细胞,利用单克隆抗体#33进行FACS检测,观察KIR2DL4分子在靶细胞表面的表达.ELISA检测KIR2DL4对IFN-γ分泌的影响,同时根据LDH的释放实验,分析KIR2DL4分子对NK-92细胞毒功能的调节. 结果 KIR2DL4分子在经KIR2DL4-pLNCX转染的靶细胞表面获得稳定高表达,且不影响其他受体在NK-92细胞上的表达水平.KIR2DL4分子能够部分限制NK-92细胞对HLA-G阳性靶细胞的杀伤作用,交联KIR2DL4分子能够诱导IFN-γ的分泌. 结论成功构建了KIR2DL4-pLNCX逆转录病毒表达载体,并使KIR2DL4分子在NK-92细胞上获得功能性的高表达.
-
杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性与子痫前期发病的相关性
目的 探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因多态性(SNP)与子痫前期发病的相关性.方法 序列特异性引物PCR(PCR-SSP)技术检测子痫前期患者71例(子痫前期组)和正常孕妇100例(对照组)的外周血KIR基因型;实时荧光定量PCR技术检测两组各5例孕妇胎盘组织中KIR2DL4 mRNA的表达情况;DNA直接测序技术检测子痫前期组40例和对照组38例孕妇外周血KIR2DL4基因外显子区及其和内含子交界区的SNP.结果 (1)基因型:对照组共发现50种KIR基因型,子痫前期组共发现40种KIR基因型,两组有16种基因型重合;子痫前期组以基因型42的表达频率高(15.5%),其次是基因型51(9.9%)和基因型47(7.0%);对照组以基因型47的表达频率高(22.O%),其次是基因型48(11.O%).两组16种重合的KIR基因型的分布比较,差异有统计学意义(P=0.01).(2)胎盘组织KIR2DL4 mRNA的表达:子痫前期组患者胎盘组织KIR2DL4 mRNA的表达为14.05±0.25,对照组为12.19±0.85,两组比较,差异有统计学意义(P=0.02).(3)KIR2DL4基因测序:KIR2DL4基因测序发现18个SNP位点,其中有7个为新发现的SNP位点,检测到的所有SNP位点的等位基因、基因型在两组的分布比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 KIR基因型可能与子痫前期的发病相关;KIR2DL4 mRNA表达量下降可能参与子痫前期的病理生理过程.
-
可溶性HLA-G上调蜕膜免疫细胞NK细胞受体的表达
sHLA-G是妊娠期特异的免疫抑制分子,在受孕子宫及妊娠期女性外周血中含量丰富,提示其在维持母胎耐受中发挥重要作用.我们前期研究发现:早期难免流产病人组蜕膜组织KIR2DL4、ILT-2、ILT-4分子表达的水平明显低于正常妊娠对照组.为进一步分析这些抑制性受体表达下降与sHLA-G是否存在联系,我们对sHLA-G与蜕膜组织免疫细胞NKR表达的关系进行了研究.我们将不同量的sHLA-GI、sHLA-G2蛋白加至蜕膜单个核细胞悬液、外周血单个核细胞悬液及NK92细胞株中,分别孵育12h、24h、48h后,用Real-Time RT-PCR、FACS对NKR的表达进行检测.研究发现sHLA-G可以不同程度地上调蜕膜单个核细胞、外周血单个核细胞、NK92细胞表面ILT-2、ILT-4、KIR2DL4的表达.这个发现让我们对sHLA-G诱导免疫耐受的机制有了更深的认识.sHLA-G上调抑制性受体表达这一作用具有重要生理意义,它可以抑制效应细胞的杀伤功能,使母胎界面微环境适于胎儿存活,从而维持母胎免疫耐受.
-
复发性流产患者蜕膜组织NK细胞受体的表达
为探讨子宫蜕膜组织NK细胞受体的表达与复发性流产发病之间的关系,采用实时荧光定量RT-PCR和免疫组织化学法检测复发性难免流产及正常早孕蜕膜组织的NK细胞受体KIR2DL4、ILT-2、ILT-4 mRNA及其蛋白的表达水平.研究结果显示:难免流产组KIR2DL4、ILT-2、ILT-4 mRNA水平明显低于正常妊娠组,免疫组化的结果也显示难免流产组KIR2DL4、ILT-2的分布密度低于正常妊娠组.该结果提示:NK细胞受体的表达水平与难免流产有一定关联.推测复发性流产患者KIR2DL4表达下调,可能会影响早孕期蜕膜化的关键进程,进而对妊娠结局产生不良影响;而1LT-2、ILT-4表达下调,可能使得免疫细胞活化阈值下降,导致局部效应细胞功能紊乱,终发生流产.
