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ADC患者体内HIV-1gp120基因的变异及其对U87细胞合成PDGF-BB与MCP-1的影响
目的 探讨HIV-1gp120在HIV-1入侵中枢神经系统(CNS)机制中的作用.方法 扩增1例艾滋病痴呆综合征(ADC)患者外周主动脉周淋巴结(PL)和CNS颞叶灰白质连接处(TGWJ)、脑室周围组织(PV)的HIV-1 gp120基因,测序并进行序列分析;构建真核表达载体pEGFP-gp120,在U87细胞中表达gp120蛋白,观察绿色荧光蛋白荧光强弱判断gp120表达;同时用免疫组化方法检测蛋白的表达,ELISA法检测U87细胞中血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的含量.结果 gp120基因序列分析结果显示,3个部位的HIV-1均为巨噬细胞嗜性,CNS来源的TGWJ和PV的HIV-1使用CCR5受体,与神经致病性有关.成功构建pEGFP-gp120表达载体,并在U87细胞中表达了gp120蛋白,转染后48 h蛋白表达量高.ADC患者不同部位来源的gp120蛋白对U87细胞PDGF-BB水平无影响(P＞0.05),但能增强其MCP-1的分泌水平,且来自外周PL的gp120对MCP-1的升高作用较CNS更显著(P＜0.05).结论 ADC患者CNS gp120的变异提高了其对CNS环境的适应能力,与HIV的神经致病性有关;gp120蛋白可刺激U87细胞分泌MCP-1,而且外周来源的gp120作用较强,利于HIV-1入侵CNS.
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ITSN1-S的SH3功能域对恶性胶质瘤细胞U87增殖能力的影响*
目的：观察ITSN1-S的SH3功能域对恶性胶质瘤细胞U87增殖能力的影响，并探讨其相关分子机制。方法：构建标记mGFP荧光的慢病毒表达质粒PCDH-CMV-MCS-EF1-Puro。将ITSN1-S的不同片段的PCR产物：EH1-EH2、EH1-EH2-CC、ITSN1-S，分别连接到慢病毒表达质粒载体中。用HEK-293T细胞分别包装上述四种质粒的慢病毒后感染U87细胞，嘌呤霉素（puro）筛选出稳定表达的细胞，分别命名为vector/U87、EH1-EH2/U87、EH1-EH2-CC/U87、ITSN1-S/U87。Western blot检测目的蛋白的表达，增殖实验和软琼脂克隆形成实验检测各组胶质瘤细胞的增殖能力。结果：增殖实验和软琼脂克隆形成实验显示与vector/U87、EH1-EH2/U87、EH1-EH2-CC/U87细胞相比较，ITSN1-S/U87细胞的增殖能力显著增强（P<0.05），但vector/U87、EH1-EH2/U87、EH1-EH2-CC/U87三组细胞之间的增殖能力差异无统计学意义（P>0.05）。增殖实验结果显示第6天时，ITSN1-S/U87、EH1-EH2-CC/U87、EH1-EH2/U87、vector/U87细胞数分别为（29.16±1.19）×104、（22.82±0.94）×104、（22.17±0.90）×104、（21.93±1.15）×104个；软琼脂克隆形成实验表明第21d时，ITSN1-S/U87克隆形成数高达（6.37±0.41）×103个，而EH1-EH2-CC/U87、EH1-EH2/U87和vector/U87克隆形成数分别为（2.65±0.34）×103、（2.23±0.31）×103和（2.1±0.29）×103个。结论：过表达ITSN1-S能显著提高胶质瘤细胞U87的增殖能力，这种促进细胞增殖的作用可能是通过SH3功能域来实现的。
