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抑制和激活Wnt信号通路对甾醇类新药NSC67657诱导HL-60细胞单核系分化的影响
目的:探讨抑制和激活Wnt信号通路在甾醇类新药NSC67657诱导HL-60细胞单核系分化中的作用和可能机制.方法:用5、10和20 μmol/L的Wnt信号通路抑制剂XAV-939作用于HL-60细胞3d,用10、20和30mmol/L的Wnt信号通路激活剂LiC1作用于HL-60细胞1d,应用RT-RCR和Western blot检测Wnt信号通路的下游靶点基因和蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞表面分化抗原CD14的表达和细胞早期凋亡,筛选佳抑制浓度和激活浓度.然后用10 μmol/L NSC67657分别对已经抑制及激活了的Wnt通路的HL-60细胞作用3d.分析比较空白对照组、NSC67657单独处理组和激活/抑制剂作用后NSC67657处理组的细胞表面抗原CD14和Wnt下游靶点蛋白的表达水平.结果:20 μmol/L XAV-939和20 mmol/L LiC1能分别有效抑制和激活HL-60细胞Wnt信号通路,分别显著下调和上调cyclinD1,TCF1,c-Jun基因(P＜0.05)和蛋白(P＜0.05)的表达,且在该条件下CD14+ HL-60细胞不超过1％,没有早期凋亡发生;NSC67657单独作用HL-60细胞能下调Wnt通路下游靶点cy-clinD1 、TCF1和c-Jun的蛋白表达(P＜0.05),CD14+细胞占(62.13±9.44)％;NSC67657作用于经XAV-939预处理的细胞,可使CD14+细胞达到(84.17±5.39)％,cyclinD1,TCF1和c-Jun蛋白表达比单独NSC67657处理组降低更显著(P＜0.01);而NSC67657作用经LiC1预处理的细胞,可使CD14+细胞减少至(33.99±8.37)％,cy-clinD1,TCF1和c-Jun蛋白表达较非处理组下降明显较低(P＜0.05),但高于单独使用NSC67657处理组(P＜0.05).结论:20 μmol/L XAV-939和20 mmol/L LiC1作为HL-60细胞Wnt信号通路的有效抑制剂和激活剂能够分别显著下调和上调Wnt下游通路靶点基因和蛋白表达,其干预后对NSC67657诱导细胞分化的影响提示Wnt信号通路可能在NSC67657诱导HL-60细胞单核系分化中起到关键作用.
