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超声基因药物传递新方法的研究与评估
目的:开发超声裸基因药物传递与治疗新方法,研究适合超声基因传递的安全计量与参数,进行安全性评价,建立超声裸基因传递系统.方法:建立一套经水听器与声功率计标定的低频超声基因传递实验系统(35.1K),用不同的计量对兔、鸡、S180肿瘤细胞悬液进行暴露,提取佳基因传递参数.用绿色荧光蛋白作为传递基因进行传递实验.用荧光法、分光光度法、扫描电镜法、激光共聚焦扫描法和流式细胞术评估实验结果.结果:佳传递参数下低频超声有效地将GFP基因传人了S180细胞,未见明显的细胞损伤与细胞毒性,转染率为35.83%(±2.53,n=6),并经活体证明细胞功能正常.90%细胞存活点的能量积累E是佳传递参数(E=3.56±0.06),80%细胞存活点的E值是损伤阈值(E=59.67±3.54).GFP的表达明显比病毒载体法强(P＜0.001).结论:超声可安全地用于基因传递和治疗,其基因表达和摄入量取决于90%细胞存活点的能量积累E.它可用作控制因子与其它参数结合控制传递效应.从结果证明平稳空化产生基因传递效应,瞬间空化造成细胞损伤.
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超声辐照携重组人血管内皮抑制素脂质微泡抑制鸡胚尿囊膜血管生成研究
目的 探讨超声波辐照击破携重组人血管内皮抑制素脂质微泡对鸡胚尿囊膜血管生成的影响.方法 采用生物素-亲和素系统制备携重组人血管内皮抑制素脂质微泡,测定微泡粒径、载药量；采用鸡胚尿囊膜模型观察超声辐照载药微泡对血管生成的抑制作用.结果 制备的载药微泡平均粒径(3.0±0.4) μm,荧光显微镜可见FITC标记的微泡表面发出绿色荧光,ELISA测得每108微泡载药量为0.8 mg；超声辐照载药微泡治疗组鸡胚尿囊膜新生血管面积、血管面积/总面积比值均小于其余各组(P＜0.05).结论 超声波辐照击破携重组人血管内皮抑制素脂质微泡具有明显抑制鸡胚尿囊膜血管生成作用.
关键词： 造影剂 超声生物效应 重组人血管内皮抑制素 血管生成 鸡胚尿囊膜 -
定量超声基因导入与效应控制
目的研究低频超声裸基因导入新方法与基因导入效应的控制, 为疾病的基因治疗提供安全可靠、无细胞毒性的导入新方法.方法用不同参数的35.1 kHz超声进行裸基因导入细胞实验,用激光共聚焦显微镜、荧光显微镜、流式细胞仪和分光光度法分析细胞膜形态、细胞膜通透性与损伤阈值、细胞存活率和基因表达.结果实验所见90%细胞存活点的超声能量积分是细胞膜通透安全控制参数, 80%细胞存活点的能量积分是细胞的损伤阈值.绿色荧光蛋白(GFP)在安全超声参数下成功导入了S180细胞,细胞转染率为35.83%±2.53%(n=6),荧光表达强度明显高于病毒转染法和控制组(P<0.001).结论安全参数下低频超声可有效地将裸基因导入S180肿瘤细胞,其基因表达强度随超声能量积累而增强,并有细胞凋亡倾向.
