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弓形虫Rhomboid-IL-2基因重组卡介苗的构建及其对犬的免疫效果
目的 构建弓形虫Rhomboid以及犬白介素2基因重组卡介苗,并观察其对免疫犬的免疫效果. 方法 将鉴定正确的弓形虫Rhombiod基因和犬IL-2基因一起克隆到大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达载体和整合表达载体中,构建重组质粒pMV261(361)-IL2-Rho.将重组质粒转入卡介苗中,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析及Western blot鉴定.分别用重组卡介苗pMV261(361)-IL2-Rho和pMV261 (361)-Rho经皮下免疫犬,检测免疫犬体液及细胞免疫水平变化并观察其存活时间. 结果 成功构建pMV261(361)-IL2-Rho重组质粒,弓形虫Rhomboid基因在重组卡介苗中稳定表达46 ku的目的蛋白,Western blot显示该蛋白能被弓形虫感染鼠血清识别.动物实验表明,rBCGpMV261(361)-IL2-Rho能诱导产生较强的体液免疫和Th1型细胞免疫应答反应,rBCGpMV361-IL2-Rho免疫组感染弓形虫后的存活时间组为(14.40±4.50)d,rBCGpMV261-IL2-Rho免疫组感染弓形虫后的存活时间组为(13.00±4.75)d,较BCG对照组存活时间(8.20±5.45)d有所延长. 结论 rBCGpMV261 (361)-IL2-Rho蛋白具有免疫原性.该重组卡介苗对犬弓形虫感染有一定保护效果.
关键词： 弓形虫 Rhomboid基因 白介素2 rBCG -
柔嫩艾美耳球虫ADF基因重组卡介苗的构建及其免疫保护性研究
目的 构建鸡柔嫩艾美耳球虫ADF基因重组卡介苗并研究其免疫保护性. 方法 应用RT-PCR技术扩增柔嫩艾美耳球虫ADF基因完整开放阅读框,克隆至pMD18-T载体中；分别用限制性内切酶Pst Ⅰ/Cla Ⅰ和PvuⅡ/Cla Ⅰ进行双酶切,ADF目的基因克隆至大肠埃希菌—分枝杆菌穿梭表达载体pMV261和整合表达载体pMV361中,获得霞组质粒pMV261-ADF和pMV36 1-ADF,重组质粒电穿孔转化卡介苗.将构建的重组卡介苗pMV261-ADF和pMV361-ADF疫苗通过滴鼻、口服、颈部皮下注射3种途径接种雏鸡,BCG免疫组作为对照.免疫后经口接种柔嫩艾美耳球虫卵囊,通过抗球虫指数(ACI)评价重组卡介苗疫苗的保护效果. 结果 重组卡介苗pMV26 1-ADF和pMV361-ADF采用滴鼻方式免疫保护效果较好,ACI值分别为161.47和169.21. 结论 构建的重组卡介苗pMV261-ADF和pMV361-ADF对柔嫩艾美耳球虫卵囊的攻击具有一定的免疫保护作用.
