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重组人IL-2联合STAg鼻内免疫BALB/c小鼠诱导的免疫应答
目的 观察重组人白细胞介素-2(rhuIL-2)联合弓形虫可溶性速殖子抗原(STAg)滴鼻免疫小鼠诱导的免疫应答,探讨rhuIL-2的佐剂效应及适宜剂量. 方法 5～6周龄BALB/c小鼠60只,随机分为6组,每组10只.实验组以STAg 20 μg或分别加rhuIL-2 250、500、1 000、2 000 IU滴鼻免疫,抗原与佐剂溶于20 μl PBS中,对照组以PBS滴鼻,免疫2次,间隔2周.末次免疫后30 d,颈椎脱臼处死全部小鼠,ELISA法检测血清IgG和粪便sIgA水平;分离脾淋巴细胞、肠上皮内淋巴细胞(iIEL),并计数. 结果 与PBS组相比,各佐剂组血清IgG水平都有增高,其中STAg+500 IU IL-2组IgG水平增高显著(P＜0.01);STAg+500 IU IL-2组和STAg+1 000 IU IL-2组粪便sIgA抗体水平显著高于PBS组和STAg组(P＜0.05).联合IL-2佐剂免疫小鼠脾淋巴细胞和产生了增殖性应答,其中STAg+500 IU IL-2组和STAg+1 000 IU IL-2组脾淋巴细胞数显著高于PBS组和STAg组(P＜0.05);TAg+500 IU IL-2组iIEL高于PBS组(P＜0.05). 结论 rhuIL-2作为佐剂联合STAg鼻内免疫小鼠可有效诱导粘膜免疫、系统的细胞免疫和体液免疫应答;500 IU IL-2为鼻内免疫小鼠的适宜剂量.
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不同剂量STAg滴鼻免疫小鼠诱导的抗弓形虫感染作用
目的观察不同剂量可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)滴鼻免疫小鼠诱导抗弓形虫感染作用,确定STAg滴鼻免疫佳剂量.方法BALB/c小鼠50只随机分为5组,实验组分别用5μg、10μg、20μg、30μg STAg/只滴鼻免疫小鼠2次,间隔2周,对照组用PBS滴鼻.末次免疫后第14d,用4×104个速殖子/只灌胃攻击全部小鼠,观察小鼠健康和死亡情况,记录体重.攻击后第30d检测粪便IgA和血清IgG,计数脾、脑组织内弓形虫速殖子,分离并计数小肠上皮内淋巴细胞(intraepithelial lymphocyte,IEL).结果20μg和30μg组小鼠存活率高于5μg、10μg及对照组.攻虫后对照组小鼠体重逐渐降低,而5μg组,10μg组(P＜0.05),20μg组(P＜0.05)和30μg组(P＜0.05)小鼠体重仍呈增高趋势.20μg和30μg组脾、脑组织内虫荷(速殖子数)显著低于5μg、10μg组和对照组(P＜0.05),实验组粪便IgA,血清IgG及IEL数量高于对照组.结论不同剂量STAg滴鼻免疫小鼠均可诱导抗弓形虫感染,20μg或30μgSTAg滴鼻免疫可诱导更有效的抗弓形虫感染保护作用
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弓形虫复合黏膜疫苗滴鼻免疫小鼠诱导的肠IEL持续性免疫应答
目的采用可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)和霍乱毒素(cholera toxin,CT)佐剂制备弓形虫复合黏膜疫苗,观察经滴鼻免疫BALB/c小鼠后诱导的肠上皮内淋巴细胞(intraepithelial lymphocytes,IEL)免疫应答及持续时间,探讨其抗弓形虫感染的作用机制.方法BALB/c小鼠96只随机分为实验组和对照组,实验组以免疫原性好的STAg(20 μg/只)为抗原和CT(1μg/只)为佐剂滴鼻免疫,对照组以PBS滴鼻.滴鼻2次(间隔2周)后分别于第1、2、3、4、6、8、10、12周处死小鼠.制备肠IEL细胞悬液,计数并涂片;免疫细胞化学法(immunocytochemistry,ICC)检测CD4+T、CD8+T细胞亚群水平.结果免疫后肠IEL显著增生,第2周达高峰,第1周至第4周(P＜0.01)高于对照组.其中以CD8+T细胞增生为主,CD8+T细胞水平第2周达高峰,第1周至第6周增高显著(P＜0.01),CD4+T细胞也略有增生,第2、3周(P＜0.05)有显著性,CD4+/CD8+比值倒置,第1、2周明显低于对照组(P＜0.05).结论弓形虫复合黏膜疫苗滴鼻免疫BALB/c小鼠可有效诱导肠IEL免疫应答,且可持续较长时间,在预防弓形虫感染中起重要作用.
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STAg和霍乱毒素滴鼻免疫小鼠诱导的鼻相关淋巴组织细胞免疫应答
目的 研究可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)和霍乱毒素(cholera toxin,CT)佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠后鼻相关淋巴组织(nasal-associated lymphoid tissue,NALT)的免疫效应及持续时间.方法 BALB/c小鼠96只随机分为实验组和对照组,实验组以免疫原性好的STAg(20μg/只)为抗原,CT(1μg/只)为佐剂滴鼻免疫,对照组以PBS滴鼻.滴鼻2次(间隔2周)后分别于第1、2、3、4、6、8、10、12周处死6只小鼠.分离NALT的淋巴细胞,计数并涂片,用免疫细胞化学法(immunocytochemistry,ICC)检测其CD4+、CD8+T细胞亚群水平.结果 小鼠免疫后,NALT淋巴细胞第1、2、6、8、12(P＜0.05)周显著增生,可持续至免疫后第12周;CD4+T细胞第1周至第6周(P＜0.05)持续显著增高,CD8+T细胞在第1周至第4周持续增高(P＜0.01),CD4+/CD8+比值第2、3周显著降低(P＜0.05).结论 STAg和CT佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠能够有效诱导NALT的免疫效应,并可持续较长时间.
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不同剂量CpG ODN联合STAg鼻内免疫BALB/c小鼠诱导的免疫应答
目的观察弓形虫可溶性速殖子抗原(STAg)与不同剂量的CpGODN联合滴鼻免疫小鼠的免疫效果,探索CpG ODN佐剂佳剂量.方法5～6周龄BALB/c小鼠50只随机分为5组,每组10只,实验组以20μg STAg联合不同剂量CpG ODN佐剂滴鼻免疫小鼠,佐剂剂量分别为0、1、5、10μg,对照组以PBS滴鼻,间隔2wk免疫2次.末次免疫后30d断颈处死全部小鼠,分离脾、Peyer's patch(PP结)、肠系膜淋巴结(MLN)和IEL淋巴细胞,观察淋巴细胞增殖情况.用ELISA的方法检测血清IgG和粪便IgA含量.结果与PBS组和0剂量佐剂组相比,10μgCpG ODN联合STAg免疫后,小鼠肠粘膜淋巴组织和脾淋巴细胞增殖明显(P＜0.05).10μg组血清IgG远高于对照组(P＜0.05),粪便IgA高于对照组(P＞0.05).结论CpG ODN可作为STAg的粘膜佐剂,10μg CpG ODN与STAg联合具有佳的免疫效果.
