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  • 弓形虫ROP31基因克隆及生物信息学分析

    作者:周剑;何深一;刘晓雨;王琳;吕刚;宋鹏霞;韩雅丽;郝珍;郭晶晶;朱曦;杜辖东;周琼;彭倩

    目的 构建弓形虫ROP31基因重组真核表达载体,对其编码的蛋白进行生物信息学分析. 方法 提取弓形虫RH株速殖子总RNA,采用PCR扩增ROP31基因,构建其真核表达载体pET30a-ROP31.通过生物信息学软件结合在线程序分析ROP31基因编码蛋白的理化性质、抗原表位、空间结构等. 结果 ROP31基因PCR扩增产物大小约1500 bp,与预期一致,构建的重组质粒经双酶切鉴定表明目的基因插入正确.生物信息学分析ROP31基大编码蛋白有多个磷酸化修饰位点,具备多个跨膜区域;二级结构和空间结构分析ROP31蛋白与ROP家族优秀DNA疫苗ROP5、ROP17、ROP18在结构上相似;IEDB在线程序及DNA MAN软件分析ROP31蛋白具备比SAG1更为优秀的线性T、B细胞表位. 结论 成功构建重组真核表达载体pROP31,生物信息学分析其编码的ROP31蛋白具备优秀的细胞表位,这将为弓形虫ROP31 DNA疫苗的研究提供理论依据.

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