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致密颗粒蛋白6文献资料
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弓形虫GRA6基因的重组、表达及鉴定
目的 构建弓形虫致密颗粒蛋白6(GRA6)基因重组质粒并在大肠埃希菌中进行表达. 方法 根据弓形虫GRA6基因序列设计并合成引物,用PCR方法从弓形虫基因组DNA中扩增GRA6基因片段,扩增产物经1.0％琼脂糖凝胶电泳鉴定后,再克隆到pGEX-4T载体中,重组质粒经限制性内切酶BamHI、EcoRI酶切鉴定并测序后,将重组质粒转化大肠埃希菌BL21后并用IPTG诱导表达,产物经SDS-PAGE分析并纯化,以Western blot分析其反应原性. 结果 以弓形虫DNA为模板扩增GRA6基因片段,经1％琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增产物大小为693 bp,与理论值相符;重组质粒经酶切鉴定构建成功,测序结果与GenBank上弓形虫RH株GRA6序列AF239283.1同源性100％;重组质粒转化菌经IPTG诱导后表达的GRA6融合蛋白分子质量单位约为52 ku,与GST-GRA6的理论分子质量相符,该融合蛋白可被GST标签抗体识别. 结论 成功重组了弓形虫GRA6基因,表达蛋白具有反应原性,为弓形虫诊断抗原试剂盒的制备奠定了基础.
