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5'-溴-2'-脱氧尿嘧啶核苷文献资料
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5'-溴-2'-脱氧尿嘧啶核苷标记人巨细胞病毒感染SD大鼠脑组织神经元模型的建立
目的 用5'-溴-2'-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记的人巨细胞病毒(HCMV)进行脑内定位注射,建立SD大鼠脑组织感染模型;研究大鼠脑组织海马部位神经元对HCMV的容许性及HCMV在其内的感染特点. 方法 运用BrdU标记HCMV基因组,并测定病毒滴度.将21只SD大鼠随机分为病毒感染组(n=18)及对照组(n=3),病毒感染组根据感染时间分为感染24、48及96 h组.每个感染时间组再分为2μl及4μl两个剂量组,每个剂量组包括3只动物,均以脑内注射途径将BrdU标记的HCMV直接注入大脑海马部位;对照组大鼠注射不含病毒的细胞培养上清液(4μl).感染大鼠术后分笼饲养,于各感染时间点处理大鼠取脑组织,冰冻切片;对海马周围部位脑组织分别运用抗BrdU及抗微管相关蛋白2(MAP-2)抗体进行免疫荧光双标染色检测标记病毒;抗pp65抗体免疫组化染色及Nissil复染检测病毒蛋白pp65. 结果 病毒感染后24 h,两个剂量组均未在神经元内检测到标记病毒及pp65.病毒感染后48h和96 h,两个剂量组在海马部位神经元中均检测到了标记病毒阳性荧光及pp65的阳性着色;而且2μl组的受感染神经元细胞数较4μl组少,但同-剂量组在镐h和96 h受感染神经元细胞数未见明显变化. 结论 成功建立了BrdU标记HCNV感染SD大鼠脑组织的模型.大鼠脑组织海马部位神经元是HCMV的半容许细胞,HCMV在其内仅表现为潜伏性感染.
