首页 > 文献资料
-
田鼠巴贝西虫Babesia microti截短型分泌抗原的重组表达及其在诊断上的应用
田鼠巴贝西虫分泌抗原1(Babesia microti secreted antigen 1,BmSA1)是一个重要的诊断抗原候选分子,但全长蛋白的表达量少,也不宜纯化.本研究在此基础上,通过生物信息学分析,选取N-末端信号肽后,C-末端跨膜区前,包含CPSF73-100C功能区的228个氨基酸所编码基因片段,重组高效表达了一个可溶性截短型抗原,解决了完整蛋白重组表达纯化的困难.纯化的截短型抗原作为酶联免疫试验(ELISA)诊断抗原,可清晰地区分阴性及阳性鼠血清,并与其他病原感染无交叉反应,显示其诊断的特异性.鼠人工感染田鼠巴贝西虫系列血清检测表明,该抗原可检测早期感染(5天)和感染(55天)以后的样本,显示其对不同时期感染的宿主均具有诊断价值.结果表明,重组B.microti截短型抗原可作为一种诊断制剂检测田鼠巴贝西虫抗体.
关键词： 田鼠巴贝西虫 截短型抗原BmSA1 克隆 表达 诊断 -
北京市密云县野栖鼠感染田鼠巴贝西虫的检测
针对2012年6月于北京市密云县辖区捕获的15只野栖鼠,检测其巴贝西虫感染状况.通过制备薄血涂片及采集心、肺组织样本提取基因组,结合镜检及聚合酶链式反应确定感染阳性样本,对巴贝西虫核糖体小亚基编码基因虫种特异片段进行扩增并测序,通过序列对比及进化树构建对野栖鼠感染的巴贝西虫进行同源性分析及虫种鉴别.本次检测的野栖鼠中1份社鼠Niviventer confucianus血液镜检阳性,对应的心、肺组织样本检测到巴贝西虫虫种特异DNA片段,同源进化分析表明,该虫株与我国浙江、福建、台湾地区的田鼠巴贝西虫分离株具有高度同源性,属于田鼠巴贝西虫Babesia microti.北京市密云县野栖鼠首次被证实存在感染田鼠巴贝西虫的情况.
-
田鼠巴贝西虫感染致宿主血小板活化初步研究
目的 探讨BALB/c小鼠感染田鼠巴贝西虫后外周血中血小板活化情况及其与红细胞染虫率的关系.方法 利用田鼠巴贝西虫红细胞染虫率为30％的种鼠抗凝血经腹腔注射感染BALB/c小鼠,感染后第1天开始采集BALB/c小鼠外周抗凝血,利用流式细胞术分别以白细胞分化抗原CD61(整合蛋白β3)和CD62P(P选择素)抗体标记,检测血小板和活化血小板数量;同时利用吉姆萨染色检测红细胞染虫率.采用Pearson相关性检验分析血小板活化率与红细胞染虫率的相关性.结果 BALB/c小鼠感染田鼠巴贝西虫后第2天其外周血中血小板的活化率开始升高,第3天高,达(15.50±0.17)％,第4天开始下降,但无明显规律性;BALB/c小鼠在感染田鼠巴贝西虫后外周血中红细胞染虫率逐渐升高,第8天高,达(63.10±3.43)％,之后逐渐下降.血小板活化率与红细胞染虫率比较差异无统计学意义(P=0.768).结论 田鼠巴贝西虫感染可引起宿主外周血中血小板的活化率升高,但与红细胞染虫率无显著相关性.
-
日本血蜱传播田鼠巴贝西虫的实验研究
目的 研究日本血蜱传播田鼠巴贝西虫的能力.方法 用日本血蜱幼蜱、若蜱和成蜱叮咬田鼠巴贝西虫阳性BALB/c小鼠,收集饱血蜱,待孵化为下一个龄期或产卵后,利用巢氏PCR法检测幼蜱的感染情况;再用感染性成蜱叮咬阴性NOD/SCID小鼠,定期采集鼠血进行检测,以观察小鼠感染情况.结果 幼蜱叮咬阳性小鼠发育为若蜱后,未检出田鼠巴贝西虫感染;若蜱叮咬阳性小鼠发育为成蜱后,8只雌性成蜱检出田鼠巴贝西虫感染,而雄性成蜱未检出田鼠巴贝西虫感染;成蜱叮咬阳性小鼠后,子代幼蜱未检出田鼠巴贝西虫感染.而12只阴性NOD/SCID小鼠被阳性成蜱叮咬后,有2只小鼠感染.结论 日本血蜱仅在若蜱-成蜱阶段可经期传播田鼠巴贝西虫,幼蜱-若蜱阶段不能经期传播田鼠巴贝西虫,亦不能经卵传播田鼠巴贝西虫.
-
田鼠巴贝西虫截短型分泌抗原1的原核表达与抗原性鉴定
目的 对田鼠巴贝西虫(Babesia microti)的诊断抗原分泌抗原1(Babesia microti secreted antigen 1,BmSA1)的截短部分(tBmSA1)进行克隆构建、原核表达与纯化,并对重组tBmSA1进行质谱鉴定以及抗原性鉴定.方法 通过PCR扩增截短型tBmSA1基因,将其插入原核表达载体pET-30a(+),转化大肠杆菌BL21 (DE3),经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组tBmSA1,使用AKTA进行镍亲和层析纯化,并对纯化的重组tBmSA1进行质谱分析,通过Western Blot和ELISA鉴定重组tBmSA1的抗原性.结果 成功构建了重组质粒pET-30a(+)-tBmSA1,重组tBmSA1得到高效表达和纯化,质谱分析验证了其正确性,Western Blot和ELISA结果显示其具有较好的抗原性.结论 实现了田鼠巴贝西虫tBmSA1的原核高效表达,并验证了其诊断价值,为田鼠巴贝西虫感染诊断奠定了基础.
