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离心法测定细胞与材料之间黏附强度的研究
建立一种简单的离心法用以评价细胞与材料之间的黏附强度.改造离心涂片机以适合研究需要;建立离心法测定三种贴壁细胞(HeLa、SH-SY5Y、ECV304)在两种材料(聚苯乙烯板、丝素蛋白膜)上的黏附强度,以研究在不同的培养时间下三种贴壁细胞在两种材料上的黏附情况.结果 表明在相同的培养时间下,三种贴壁细胞与丝素蛋白膜的黏附强度强于与聚苯乙烯的黏附强度,其黏附强度的大小可以相对量化.结论 该离心法检测细胞对生物材料黏附强度的方法简单易行,重复性高;丝素膜材料是一较为理想的生物材料.
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再生丝素膜对鼠胚真皮层成纤维细胞遗传特性的影响
目的:研究再生丝素膜(WL组,HY组,SD组)对大鼠鼠胚成纤维细胞的遗传物质的影响.方法:采用浸提液法在体外培养鼠胚成纤维细胞,计算细胞的微核率(MNF)和染色体畸变率(CAF),用单细胞电泳法(SCGE assay)检测基因组DNA的损伤程度.结果:WL组、SD组再生丝素膜和空白对照组的细胞微核率(MNF)和染色体畸变率(CAF)无显著性差异(P＞0.05),无明显彗星现象;而HY组再生丝素膜与阴性对照比较有显著差异(P＜0.01).结论:WL组和SD组再生丝素膜对种子细胞的遗传学特性无明显影响,优于HY组.
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丝素蛋白膜对犬不同长度尿道缺损的修复效果
背景:天然丝素蛋白膜是较为理想的尿道缺损修复材料,其修复缺损尿道是否存在着长度问题,作者未查到确切的证实性资料.目的:实验拟进一步观察丝素蛋白膜修复不同长度尿道缺损的效果.设计、时间及地点:随机分组设计的动物对照实验,于2007-06/08在南方医科大学附属南方医院动物实验室完成.材料:成年雄性比格犬14只,按随机数字表法分为3组,1.5cm尿道缺损组(n=6),3.0cm尿道缺损组(n=6),对照组(n=2);丝素蛋白膜由浙江大学闵思佳教授惠赠,孔径150～250μm,孔隙率85%～95%.方法:1.5cm尿道缺损组和3.0cm尿道缺损组:切开犬阴茎皮肤及皮下组织,游离出尿道海绵体,将尿道海绵体分别切除1.5,3.0cm,再分别用1.5,3.0cm丝素蛋白支架修复尿道缺损.对照组犬行尿道海绵体游离后即逐层缝合海绵体包膜、皮下组织及皮肤.主要观察指标:术后6,12周逆行尿道造影,免疫组织化学染色观察尿道组织再生情况.结果:1.5cm尿道缺损组6只动物未见尿瘘及明显尿道狭窄梗阻,术后6周时修复区稍粗糙、不光滑,术后12周与对照组无明显差异;3.0cm尿道缺损组6只动物均出现尿瘘或修复区管腔狭小、部分充盈缺损,术后6周和12周无明显差异.免疫组织化学染色证实1.5cm尿道缺损组修复区腔面为尿道移行细胞覆盖;3.0cm尿道缺损组修复区尿道外观呈苍白、致密坚硬且管腔狭小,免疫组织化学染色证实修复区腔面无尿道移行细胞覆盖.结论:单纯丝素蛋白膜能修复1.5cm短距离尿道缺损,对3.0cm以上长距离缺损的修复效果不理想.
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丝素蛋白膜修复海绵体神经缺损的实验研究
目的 探讨丝素蛋白膜(SF)修复海绵体神经缺损的效果.方法 选取健康雄性纯系SD大鼠33只,随机将其分成3组,假手术组(A组,n=11)、实验组(B组,n=11)及海绵体神经切断组(C组,n=11).A组大鼠单纯游离双侧海绵体神经;B组大鼠首先建立海绵体缺损模型,后用SF桥接修复;C组大鼠切断双侧海绵体神经.术后3个月对各组大鼠进行阿朴吗啡试验,观察阴茎勃起情况并记录勃起次数.然后取阴茎中后部海绵体组织应用免疫组化方法检测神经型一氧化氮合酶(nNOS)的表达.对于所得数据使用SPSS17.0统计软件进行统计学分析.结果 A组与B组大鼠阴茎勃起次数、勃起率及nN0S神经纤维数目明显高于C组,统计学分析证实前两组与C组的差另别有统计学意义,前两组间的差别亦有统计学意义.结论 SF具有促进大鼠海绵体神经损伤修复的能力;本研究为丝素蛋白膜修复海绵体神经缺损的临床应用提供了实验依据.
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兔膀胱移行上皮细胞与丝素蛋白膜相容性研究
目的 探讨用于膀胱组织工程研究的移行上皮种子细胞的培养方法,检测丝素蛋白膜与膀胱移行上皮细胞的细胞相容性,探讨构建泌尿系腔道组织工程器官的可能性.方法 (1)取兔膀胱移行上皮细胞体外培养,观察细胞形态变化及生长、增殖过程,并进行免疫荧光鉴定;(2)分别设立空白组(无细胞)、阴性对照组(培养基)和实验组(丝素蛋白膜浸提液).取对数生长期的膀胱移行上皮细胞,lx104/ml接种于96孔板中,每组各5孔,于接种后24、72和120h,通过MTT法显色.并于酶标仪490nm波长下检测吸光度值,计算相对增殖率,对丝素蛋白膜与膀胱移行上皮细胞的相容性进行评估.结果 细胞在第9～10天融合形成单层,细胞形态呈多角形的铺路石子状,经免疫荧光鉴定证实为移行上皮细胞;24、72和120 h实验组吸光度值分别为0.424±0.020、0.996±0.118和1.285±0.048.阴性对照吸光度值分别为0.419±0.030、1.105±0.098和1.228±0.052,两组比较无明显差异(P＞0.05).结论 丝素蛋白膜与膀胱移行上皮细胞相容性良好,具有作为泌尿系腔道组织工程支架的潜在运用价值.
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丝素蛋白膜修复兔尿道缺损的实验研究
目的 探索丝素蛋白膜修复尿道缺损的效果.方法 24只雄性新西兰白兔随机分成3组,实验组、对照组Ⅰ及对照组Ⅱ.实验组12只兔切除尿道中段1.5 cm建立尿道缺损模型,应用丝素蛋白膜修复,术后2、4、8、16周每次3只行逆行尿道造影、组织学及免疫组织化学检测;对照组16只兔行尿道海绵体游离后即缝合切口,对照组Ⅱ6只兔切除尿道中段1.5cm建立尿道缺损模型后缝合切口依靠尿道自体再生修复缺损,术后8周、16周对照组Ⅰ及对照组Ⅱ每次3只行逆行尿道造影、组织学及免疫组织化学检测.结果 实验组12只兔应用丝素蛋白膜修复尿道缺损未见尿道狭窄,尿道粘膜细胞及平滑肌细胞修复缺损区,未见纤维化形成,16周时丝素蛋白膜完全降解,粘膜细胞及平滑肌细胞排列有序,免疫组织化学染色证实修复区腔面覆盖细胞为尿道移行细胞.结论 丝素蛋白膜能够诱导尿道粘膜上皮细胞及尿道平滑肌的生长,具有促进尿道缺损修复的能力.
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固相基质表面von Willebrand Factor抗体的固定化研究
以丝素蛋白膜和聚乳酸膜为基质,采用辉光放电等离子体处理技术和共价交联的方法对von Willebrand factor(vWf)抗体进行了固定化研究.利用抗体过剩法和酶联免疫实验对固定化效率进行了评价,固定化抗体的活性采用体外凝血时间(APTT, TT 和 PT)测定进行检测.结果显示固定化效率高可以达到23.88%,酶联免疫实验均显示阳性,APTT、TT项有明显延长,有的还超出了仪器的测量范围,由此说明,通过这种方法可以有效地对vWf抗体进行共价固定化.本研究拓宽了抗体固定化技术的应用范围,为血管性假血友病的早期快速诊断仪器或试剂盒的研制打下技术基础,同时为其它凝血因子抗体相关的生物材料研究与开发提供一种新思路.
