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7种中药提取物对PXR介导的CYP3A4转录调节作用
目的:观察7种中药的粗提取物能否通过活化人孕烷X受体(PXR)诱导CYP3A4的转录表达.方法:采用浸提法和回流法制备中药的粗提取物.用PXR依赖的瞬时转染报告基因试验检测7种中药粗提取物的诱导作用.结果:菊花、枸杞子、丹参水提取物,菊花、山楂、金银花、山药、丹参醇提取物等均能通过活化PXR诱导HepG2细胞CYP3A4基因的转录表达.结论:菊花水提取物、枸杞子水提取物、丹参水提取物、菊花醇提取物、山楂醇提取物、枸杞子醇提取物、金银花醇提取物、山药醇提取物和丹参醇提取物等7种中药的提取物均能诱导CYP3A4基因的转录表达,其作用机制是通过活化PXR.菊花、山楂、枸杞子、金银花、山药和丹参的摄入可能影响其他CYP3A4底物在体内的代谢.
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采用体外报告基因试验方法研究妊高征患者总雌激素效应
目的 建立检测人血清总雌激素活性的报告基因试验方法,研究妊娠高血压综合征与血清环境雌激素水平的关系. 方法采用ER介导的报告基因试验方法,检测了15例正常孕妇和10例妊高征患者的血清总雌激素活性.结果 rERa报告基因系统能够很好的反映人血清中的总雌激素活性;妊高征患者血清总雌激素活性显著高于正常孕妇对照(P<0.01). 结论妊高征患者血清环境雌激素活性可能高于正常对照,这可能和妊高征的发生和发展密切相关.
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基于pGL-4载体的雌激素受体报告基因实验系统的建立与验证
目的 建立和评价一种新的基于pGL-4载体的雌激素受体报告基因实验系统.方法 通过瞬时共转染将雌激素受体表达载体、报告基因载体和内参载体转入LLC-MK2细胞,用特定浓度受试物进行染毒并观察其反应.结果 (1)细胞毒性试验显示,除双酚A和壬基酚在1 00 μmol/L时有细胞毒性外,其余受试物在设定浓度未见细胞毒性.(2)雌激素受体oα报告基因实验系统低检测限为1.9×10-11 mol/L,雌二醇和己烯雌酚在10-8mol/L分别产生30.7倍和24.1倍对照组的荧光素酶表达,双酚A、壬基酚和染料木黄酮均能诱导该系统荧光素酶的表达,他莫昔芬和染料木黄酮能抑制雌二醇诱导的荧光素酶表达.(3)雌激素受体β报告基因实验系统中,雌二醇和己烯雌酚分别产生对照组14.4倍和5.6倍荧光素酶表达.结论 基于pGL-4载体建立的雌激素受体报告基因实验系统有着良好的重复性、灵敏度和特异度,且能检测不同雌激素受体亚型的激动剂和拮抗剂,是一种新的用于内分泌干扰物大通量筛选的报告基因实验系统.
关键词： pGL-4载体 报告基因实验 雌激素受体 LLC-MK2恒河猴肾细胞 荧光素酶
