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F1、F2亚单位文献资料
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人偏肺病毒F1 、F2亚单位原核表达系统的构建及多克隆抗体制备
目的 构建人偏肺病毒融合蛋白亚单位F1、F2原核表达系统,初步获得抗F1、F2重组蛋白的多克隆抗体,为相关疫苗的研究奠定基础.方法 聚合酶链反应(PCR)法扩增F1、F2基因片段,经T-A克隆确保其准确性,双酶切后插入原核表达载体pET32a(+)中,转化大肠埃希菌BL21(DE3),按优化后条件大量诱导表达,纯化后经Western Blot检测特异性.取纯化蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,ELISA法检测效价,间接免疫荧光法(IFA)检测多克隆抗体是否能与人偏肺病毒发生特异性反应.结果 F1、F2基因均正确插入pET32a(+)中,并具有正确的读码框架.0.5 mmol/L IPTG 37℃诱导培养5h可获得大量带His标签的重组蛋白,纯化后浓度分别达到200 μg/ml和300 μg/ml.Western Blot结果显示,重组蛋白可被抗His标签抗体特异识别;免疫小鼠获得多克隆抗体效价分别为抗pET32a-F1高1:640,抗pET32a-F2高1:40 960.IFA显示抗pET32a-F1、抗pET32a-F2多克隆抗体均可与人偏肺病毒作用产生特异性荧光.结论 成功构建了F1、F2的原核表达质粒,并在大肠埃希菌中获得高效表达,该蛋白具有良好的抗原性;免疫小鼠获得特异性多克隆抗体,有利于人偏肺病毒的深入研究.
