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木犀草素诱导人脐带间充质细胞化为神经细胞潜能的研究
目的:探讨木犀草素诱导脐带间充质细胞(hUCMSCs)分化为神经细胞的潜能.方法:采用终浓度为10μg/mL中药单体木犀草素及0.5％DMSO对人hUCMSCs进行诱导.显微镜下观察细胞形态变化,细胞免疫荧光技术检测神经细胞细胞标记物nestin和GFAP的表达,实时荧光定量PCR测定神经分化相关NSE、nestin、GFAP、MAP2、NEFH 5种基因的表达量变化情况,分析两组数据.结果:木犀草素诱导人hUCMSCs第6天,显微镜下发现胞核增大,细胞呈分叉状改变,细胞伸出较多细长的突起,呈现出神经细胞形态样改变;细胞免疫荧光技术检测显示,实验组大部分细胞神经标记物nestin、GFAP表达阳性,平均荧光分别强度为2.64、4.72,对照组仅有少量细胞nestin、GFAP表达阳性,平均荧光强度分别为0.24、0.46;实时荧光定量PCR结果显示,木犀草素对nestin、GFAP、MAP2、NEFH mRNA的表达有明显影响(P＜0.05),对NSE mRNA的表达影响不明显.结论:木犀草素具有诱导hUCMSCs向神经细胞方向分化的潜能.
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三种成体干细胞对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症状态的影响
目的：比较人羊膜上皮细胞（（human amniotic epithelial cell, H-AEC））、羊膜间充质细胞（human amniotic mesenchymal cell, HA-MSC）和脐带间充质细胞（Umbilical cord mesenchymal stem cells, UC-MSC）分泌的细胞因子对脂多糖刺激巨噬细胞系RAW264.7炎症状态的影响。方法将LPS刺激的RAW264.7细胞炎症模型作为对照组，比较H-AEC、HA-MSC、UC-MSC和RAW264.7共培养或条件培养基培养RAW264.7对RAW264.7炎症状态的影响。比较各组RAW264.7细胞的迁移能力；检测各组细胞分泌一氧化氮（NO）的水平；用实时定量多聚酶链反应（RT-PCR）检测各组细胞经典激活的巨噬细胞（classically activated macrophage, M1 macrophage）相关的促炎基因如白介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死基因а（TNFа）、一氧化氮合成酶-2（NOS-2）以及M2 macrophage相关的抑炎基因如精氨酸酶（Arg-1）、甘露糖受体基因CD206、B类清道夫受体CD36）表达情况。结果（1）H-AEC、HA-MSC、UC-MSC处理后RAW264.7的迁移率分别为14.7%±4.5%、9.6%±0.7%、13.0%±0.9%，与对照组（31.1%±11.0%）相比，3种细胞的条件培养基处理后RAW264.7的迁移率均降低，差异具有显著性（P<0.05）；（2）H-AEC、HA-MSC、UC-MSC共培养后RAW264.7细胞分泌NO的水平分别为24.26±0.72、44.52±2.51、42.25±0.76μmol/L，与对照组（45.65±1.78μmol/L）相比，H-AEC组细胞分泌的NO有显著性下降（P<0.05）；（3）促炎基因与抑炎基因的表达改变：（A）H-AEC处理组促炎基因IL-1β、TNFа、NOS-2、INFβ的表达下调，与对照组相比有显著差别；HA-MSC、UC-MSC处理组促炎基因INFβ表达下调显著，其余基因均上调表达；抑炎相关基因如Arg-1、CD206、CD36均上调；（B）3组细胞干预后抑炎症相关基因Arg-1、CD206、CD36表达均上调，与对照组有显著差异。结论人羊膜上皮细胞、羊膜间充质细胞和脐带间充质细胞可以促进巨噬细胞向M2型分化，但其效果和机制存在不同。
