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葛根芩连结肠定位片HPLC指纹图谱定性及定量分析
目的:建立葛根芩连结肠定位片高效液相色谱法(HPLC)指纹图谱定性及定量分析方法.方法:采用HPLC,以Agilent Zorbax SB-C18(4.6mm×250mm,5μm)为色谱柱,以乙腈(b)-0.015mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相梯度洗脱,检测波长:270nm;流速:1mL/min;柱温:30℃;进样量:10μL.检测时间:120min.采用指纹图谱相似度软件(2004a版)进行数据分析.结果:通过方法学考察建立了葛根芩连结肠定位片指纹图谱的定性定量检测方法,并对12批葛根芩连结肠定位片进行指纹图谱检测分析,共检测出35个共有峰,12批制剂相似度均大于0.9,制剂生产工艺稳定可行.结论:该方法具有可操作性,能有效控制葛根芩连结肠定位片的质量.
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葛根芩连结肠定位片对湿热内蕴型溃疡性结肠炎家兔模型Th1/Th2细胞因子平衡的影响
目的 观察葛根芩连结肠定位(GGQLJC)片对湿热内蕴型溃疡性结肠炎(UC)家兔模型Th1/Th2细胞因子平衡的影响,探讨其治疗湿热内蕴型UC的免疫学机制.方法 采用高脂高糖饮食法造出家兔湿热内蕴型体质,结合三硝基苯磺酸(TNBS)法建立湿热内蕴型UC模型;将家兔分为7组,每组8只:正常组,模型组,GGQLJC片高剂量组,GGQLJC片中剂量组,GGQLJC片低剂量组,阳性西药柳氮磺胺吡啶(SASP)组,传统葛根芩连(GGQL)片组;对家兔进行临床活动度观察、疾病活动度指数(DAI)评分、结肠黏膜损伤指数(CMDI)评分、组织学损伤(TDI)评估,检测结肠长度重量、脾脏和胸腺的重量、结肠组织中髓过氧化物酶MPO活性、采用酶联免疫吸附法(ELISA)分析家兔血清和结肠组织中Th1细胞因子IL-1β3、TNF-α和Th2细胞因子IL-4、IL-13水平.结果 各治疗组能够有效缓解湿热内蕴型UC家兔的临床症状,降低DAI评分、CMDI评分、TDI评分,增加结肠长度、降低结肠和脾脏重量、增加胸腺的重量,降低MPO活性,降低家兔血清及结肠组织Th1细胞因子IL-1β和TNF-α并提高Th2细胞因子IL-4、IL-13的表达,其中以GGQLJC片高剂量组及SASP组作用效果更为显著.结论 GGQLJC片可以改善湿热型溃疡性结肠炎的炎症反应,调节Th1/Th2细胞的平衡,这可能是其治疗湿热内蕴型UC的作用机制之一.
关键词： 葛根芩连结肠定位片 湿热内蕴型UC Th1/Th2细胞因子 -
葛根芩连结肠定位片对湿热内蕴型溃疡性结肠炎模型兔结肠组织PPAR-γ、NF-κB p65蛋白表达的影响
目的:观察葛根芩连结肠定位片(GGQLJC)对湿热内蕴型溃疡性结肠炎(UC)模型兔结肠组织过氧化物酶增殖物激活受体(PPAR-γ)和核因子κB(NF-κB p65)蛋白表达的影响.方法:将56只家兔随机分为正常组(生理盐水)、模型组(生理盐水)、柳氮磺胺吡啶片(SASP)组(阳性对照,0.300 g/kg)、葛根芩连片(GGQL)组(0.225 g/kg)和GGQLJC高、中、低剂量组(1.036、0.518、0.259 g/kg),每组8只.除正常组外,其余各组兔复制湿热内蕴型UC模型,于造模结束后次日ig给药,每天1次,连续14 d.对兔疾病活动度指数(DAI)、结肠黏膜损伤指数(CMDI)、组织学损伤(TDI)进行评分,测定结肠、脾、胸腺指数,并检测结肠组织中PPAR-γ、NF-κB p65蛋白表达.结果:与正常组比较,模型组兔DAI、CMDI和TDI评分以及结肠指数、脾指数、结肠组织中NF-κB p65蛋白表达水平均显著升高(P<0.01),胸腺指数、结肠组织中PPAR-γ蛋白表达水平均显著降低(P<0.01);与模型组比较,各给药组兔上述指标均显著改善(P<0.05或P<0.01);与GGQL组比较,SASP组和GGQLJC高、中剂量组兔DAI和TDI评分、脾指数、结肠指数、结肠组织中NF-κB p65蛋白表达水平以及SASP组和GGQLJC高剂量组兔CMDI评分均显著降低(P<0.05),SASP组和GGQLJC高、中剂量组兔结肠组织中PPAR-γ蛋白表达水平显著升高(P<0.05或P<0.01).结论:GGQLJC对湿热内蕴型UC模型兔有一定改善作用,且作用优于GGQL;其机制可能与上调结肠组织中PPAR-γ蛋白表达和下调NF-κB p65蛋白表达有关.
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葛根芩连结肠定位片提取方法考察
目的:优选葛根芩连结肠定位片的提取方法.方法:采用高技液相色谱法测定,以葛根素、大豆苷、黄芩苷、汉黄芩苷、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱及甘草酸铵的含量为指标,对提取方法、提取溶剂和提取时间进行考察.结果:优化的提取条件为以30％乙醇为提取溶剂,超声提取30 min.结论:优化提取工艺简便、稳定合理可行,为葛根芩连结肠定位片提取方法及质量控制提供了较好的实验依据.
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高效液相色谱法测定葛根芩连结肠定位片中葛根素的含量
目的:建立高效液相色谱法测定葛根芩连结肠定位片中葛根素含量的方法.方法:采用Agilent ZORBAX SB-C18(4.6×250mm,5μm)色谱柱;流动相:乙腈-0.015mol/L磷酸二氢钾溶液;检测波长:270nm;流速:1mL·main-1;柱温:30℃.结果:葛根素在0.02040～0.1226mg·mL-1范围内浓度与峰面积呈良好线性,线性方程为Y=23952860.5024X,R=0.9999,平均加样回收率为101.2％,RSD为1.7％.结论:本实验建立的含量测定方法简便快捷,结果准确,可用于葛根芩连结肠定位片质量控制.
