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喘可治抑制灭活HIV-1颗粒诱导人CD4+T细胞凋亡机制研究
目的 通过深入研究HIVp对CD4+T细胞凋亡的影响,以探讨HIV病中CD4+T细胞丢失的可能机制以及喘可治(CKZ)对CD4+T细胞凋亡的调控作用.方法 AT-2灭活HIV-1ⅢB型病毒颗粒,ELISA法检测p24抗原的含量;然后将HIVp加入到PBMCs中,使p24抗原终浓度为1 ng·mL-1;在相应的组中加入喘可治,使其终浓度为40 μL·mL -1(v/v).48 h后,运用荧光标记的Annexin V染色技术结合流式细胞术评价CD4+T细胞的凋亡率;运用免疫荧光抗体染色技术结合流式细胞术检测CD4+T细胞CD95和DR5的表达;运用胞内免疫荧光抗体染色技术和分子探针染色技术结合流式细胞术检测CD4+T细胞Apo2.7和线粒体内膜膜电势(△ψm)的水平.结果 与对照组相比,HIVp可以引起明显的CD4+T细胞凋亡(P＜0.01),而喘可治能够有效抑制HIVp引发的CD4+T细胞凋亡(P＜0.01).结论 HIVp通过外源性凋亡途径和内源性凋亡途径删除CD4+T细胞,从而导致免疫缺陷;喘可治能够保护CD4+T细胞而有望开发成为艾滋病治疗的辅助药物.
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灭活HIV-1颗粒对人CD4+T细胞活化标记分子CD25、CD71和HLA-DR表达的作用
目的 通过深入研究AT-2灭活HIV-1颗粒对人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PB.MCs)来源的CIM+T细胞中期活化标记分子(CD25)和晚期活化标记分子(CD71和HLA-DR)的作用,进一步探讨HIV病中普遍性的免疫过度活化的病理机制.方法 AT-2灭活HIV-1ⅢB型病毒颗粒,ELISA法检测p24抗原的含量,调整p24抗原含量为50 ns/mL;然后按照p24抗原量为0.1 as/mL(记作HIV.11/500组)、1 as/mL(记作HIV-1 1/50组)和10 ns/mE(记作HIV-11/5组)的浓度加入到PBMCs中,以植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)组为阳性对照,24 h后,运用免疫荧光抗体染色技术结合流式细胞术检测PBMCs中CD4+T细胞CD25的表达百分率;48 h后,运用免疫荧光抗体染色技术结合流式细胞术检测PBMCs中CIM+T细胞CD71和HLA-DR的表达百分率.结果 24 h后,空白对照组中,CD4+T细胞CD25的表达百分率为(9.46±2.12)%,PHA组为(79.45±3.72)%,HIV-11/500组为(14.89±2.53)%,HIV-11/50组为(19.04±2.41)%,HIV-11/5组为(23.50±2.21)%;48 h后,空白对照组中,CD4+T细胞CD71的表达百分率为(3.39±1.40)%,PHA组为(75.52±5.14)%,HIV-11/500组为(11.70±2.34)%,HIV-11/50组为(18.45±3.19)%,HIV-11/5组为(22.59±2.96)%;CD4+T细胞HLA-DR的表达百分率为(8.11±2.13)%,PHA组为(66.48±6.81)%,HIV-11/500组为(14.52±1.68)%,HIV-11/50组为(19.94±2.38)%,HIV-1 1/5组为(23.74±2.30)%.结论 AT-2灭活的HIV-1ⅢB颗粒能够明显的诱导PBMCs中CD4+T细胞活化,并可能引起CD4+T细胞增殖,从而为HIV-1感染提供更多的"燃料细胞".
