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泰泽氏菌TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法的建立及应用
目的 建立泰泽氏菌的TaqMan小沟结合物(MGB)探针荧光定量PCR检测方法.方法 针对泰泽氏菌16S rRNA基因的保守区设计特异性引物和探针,建立MGB探针荧光定量PCR方法,并验证该方法的特异性、敏感性和稳定性.对2008-2011年采集的1156份临床样本进行检测,同时进行普通PCR检测作为对照.结果 泰泽氏菌TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法具有高度特异性,与肝螺杆菌、幽门螺杆菌、空肠弯曲菌、侵肺巴斯德氏菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌之间无交叉反应,检测灵敏度达2.2 copy/μl.标准曲线显示各浓度范围内具有良好线性关系,相关系数为0.999,斜率为-3.204,PCR效率为100％.对1156份临床样本进行检测,荧光定量PCR检出101份泰泽氏菌阳性样本,而普通PCR则仅检出44份.荧光定量PCR方法从临床样本中检出泰泽氏菌DNA仅需2h.结论 TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法具有特异、灵敏和稳定性,适于泰泽氏菌的快速检测.
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实验动物泰泽氏菌、肺支原体、兔出血症病毒检测方法的评价
泰泽氏菌、肺支原体、兔出血症病毒是实验动物重要的致病病原体,可引起呼吸系统、消化系统疾病,对动物的生产和动物实验可产生不良影响.本文对上述国家检测标准规定必须检测且有检测难度的三种病原体进行方法学总结,以获得更好特异性和敏感性的诊断方法;提出传统方法初检、PCR方法复检的方法以提高检测结果的准确性和可靠性.
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ICR小鼠人工感染泰泽氏菌的组织病变观察
20只ICR小鼠经尾静脉途径人工感染泰泽氏菌.感染小鼠健康活泼,与对照小鼠无区别.感染后4～7天,10只经醋酸可的松激发的小鼠其肝脏均表现出轻重不等的散在、灶性病变以至弥漫性灶性坏死,Giemsa染色镜检可见数量不等、典型的泰泽氏菌,细菌培养阴性.10只未经激发小鼠和5只对照小鼠均未见有病变,镜检也未查到泰泽氏菌.上述试验结果表明,泰泽氏菌在ICR小鼠体内的繁殖和形成肝脏病变与机体的免疫状态有密切关系.
