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猪卵透明带-3β文献资料
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基因重组大肠杆菌表达截短型pZP3β的发酵条件优化
目的:对已构建好的表达pZP3β蛋白(pZP130)工程菌的培养条件进行优化,通过在5 L罐中发酵和Ni柱纯化,以期获取较大量目的产物.方法:在摇瓶中改变不同的培养及诱导条件,比较工程菌的生长和目的蛋白的表达,优化发酵条件;并在5 L发酵罐中进行发酵,获得菌体,破碎后进行Ni柱纯化.结果:优化的发酵条件是:10%的接种量,加入2%甘油的培养基培养菌体3 h后加入0.5 mmol/L IPTG,诱导4 h后收样.在5 L发酵罐中发酵,获得菌体量36g/L,经Ni柱纯化,获得蛋白粗制品33 mg/L发酵液.结论:截短型pZP3β蛋白可以在E coli中获得较高表达,并且可以通过发酵和Ni柱纯化得到较大量的蛋白,这有助于pZP的深入研究和应用.
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猪卵透明带-3β蛋白核心片断在E.coli中的表达
目的:探讨通过基因工程的方法在大肠杆菌中表达猪卵透明带蛋白pZP3b的核心片断.方法:采用PCR方法扩增原cDNA中编码第44-306个氨基酸的pZP3β核心片断的DNA序列,克隆入pET-3c载体进而在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)pLysS中表达.结果:表达的pZP3β核心蛋白占菌体总蛋白的15%,并经Western-blot鉴定为目的蛋白.结论:pZP3β核心片断在大肠杆菌中获得较高的表达,有利于产物的纯化,为后续阐明pZP3β核心区域的性质和相关抗生育研究打下了基础.
