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EML4-ALK融合基因变体1和变体3质控品的建立
目的:建立EML4-ALK融合基因质控品,用于评价人类EML4-ALK融合基因突变检测试剂盒的性能.方法:根据人类EML4-ALK融合基因序列,合成EML4-ALK融合基因变体1(V1)和变体3(V3)的基因序列.采用限制性内切酶KpnⅠ和HindⅢ对带有目的基因的质粒和表达载体分别进行酶切,将目的基因与载体连接,转化DH5α感受态细胞,筛选阳性菌落进行测序.将测序结果正确的单个菌落进行超声诱导,制备假病毒溶液,并用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对假病毒溶液提取的RNA进行检测.结果:对人类EML4-ALK融合基因V1和V3质控品进行序列测定和荧光定量RT-PCR检测,结果表明成功建立了人类EML4-ALK融合基因V1和V3假病毒质控品.结论:本研究建立了人类EML4-ALK融合基因变体假病毒质控品的方法.可为药物靶向治疗基因检测试剂质量控制提供参考.
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BCR-ABL融合基因检测试剂盒质控品的建立
目的:建立BCR-ABL融合基因质控品,评价人类BCR-ABL融合基因突变检测试剂盒的性能.方法:根据人类BCR-ABL e1a2和e14a2型融合基因mRNA序列,设计覆盖断裂点序列,合成目的融合基因序列.用限制性内切酶Bgl Ⅱ和Hind Ⅲ对含有目的融合基因的质粒和表达载体进行酶切,连接酶切产物.将连接产物转化DH5α感受态细胞,筛选单个阳性菌落进行验证.将正确的单个菌落进行超声诱导,制备假病毒溶液.用荧光逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对假病毒溶液提取的RNA进行检测.结果:PCR结果和测序结果表明成功构建人类BCR-ABL融合基因e1a2和e14a2型假病毒质粒;荧光RT-PCR结果表明构建的e1a2和e14a2型假病毒质粒能够表达目的RNA,并且能被市售试剂盒正确检出,可以作为RNA质控品.结论:本研究建立人类BCR-ABL融合基因RNA质控品,用于评价BCR-ABL融合基因突变检测试剂盒的性能,为BCR-ABL融合基因相关白血病的临床诊断及靶向治疗提供指导.
