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体外心肌毒性代谢组学研究中模型药物多柔比星浓度及受试时间筛选
目的 筛选体外心肌毒性代谢组学研究中模型药物盐酸多柔比星(DOX)的受试浓度及受试时间.方法 采用MTS法测定DOX作用24、48、96 h后对原代心肌(PC)细胞活力的影响,确定佳的受试总时长;并在佳受试时间内,测定不同浓度DOX对PC细胞活力的影响.通过显微镜下观察细胞形态改变,综合分析确定DOX的低、高浓度及不同的受试时间点.结果 DOX的佳受试总时长为48 h,作用48 h的IC50值为(1.03±0.40) μmol/L.综合分析确定DOX的受试低、高浓度分别为0.09和3.44 μmol/L,分别于药物暴露0、6、24和48 h时收获并测定样品.结论 建立了一种确定体外心肌毒性代谢组学研究中受试药物浓度及受试时间的方法,为此类体外代谢组学研究提供参考依据.
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体外心肌毒性代谢组学样品预处理及UPLC/Q-TOF-MS条件优化
目的 筛选佳的体外原代心肌(PC)细胞代谢组学样品预处理方法,对超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术(UPLC/Q-TOF-MS)的色谱-质谱条件优化,为建立体外心肌毒性代谢组学研究方法奠定基础.方法 利用UPLC/Q-TOF-MS技术,分别考察0.05％胰酶消化后冰甲醇提取和刮刀刮取后6种不同溶剂提取的心肌细胞样品预处理方法,考察5种流动相梯度洗脱方案和正、负离子检测模式下的基峰离子流图,利用质量控制样本(QC)进行仪器精密度、方法精密度和样本稳定性试验等方法学考察.结果 佳的心肌细胞样品预处理方法为:0.05％胰蛋白酶-0.02％EDTA消化后-80℃甲醇直接提取.佳的流动相洗脱程序为:0 min,2.0％ A;2min,25.0％ A:6min,40.0％ A;12min,90.0％ A;保持2min:16min,2.0％A;保持2 min.佳的质谱检测模式为:正离子模式.本方法的仪器精密度、方法精密度和样本稳定性试验以相对峰面积比值的RSD计分别为4.9％～14.9％、8.6％～17.8％和5.2％～16.3％,以保留时间的RSD计均＜1.0％,符合检测要求.结论 确定了佳的心肌细胞样品预处理方法及UPLC/Q-TOF-MS分析条件,为建立和完善体外心肌毒性代谢组学研究提供参考依据.
关键词： 体外心肌毒性 代谢组学 样品预处理 超高效液相色谱-飞行时间质谱 条件优化
