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C28株文献资料
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重组CHO细胞C28株S基因序列的测定及分析
目的 测定重组CHO细胞C28株S基因序列,研究其遗传稳定性,并与已全基因序列测定的乙型肝炎病毒的S基因序列进行比较分析,预测和揭示现有疫苗株对当前疾病流行株的防病效果.方法 从C28株中选取第22代、24代、25代、27代、28代、29代、30代、31代、32代、33代和34代细胞,根据GenBank中C基因型adr亚型乙型肝炎病毒的全基因序列设计引物.采用酚-氯仿法抽提CHO细胞基因组DNA,用PCR法扩增各代次细胞的S基因,回收700 bp左右的目的片段,克降至pMD18-T载体上进行序列测定.利用生物学软件MEGA4.1和BioEdit进行S基因序列同源性分析,绘制系统进化树,分析与其他HBV病毒株S基因的同源性.应用实验动物测定C28株生产的重组乙型肝炎疫苗的效价.结果 C28株十一个代次之间S基因序列核苷酸和氨基酸同源性均为100％；C28株十一个代次S基因与其他病毒株S基因比较,与C基因型乙型肝炎病毒同源性高,与其他基因型乙型肝炎病毒的核苷酸同源性达91.4％～95.1％,氨基酸同源性达84.5％ ～ 93.3％.免疫NIH小鼠结果显示5批重组乙型肝炎疫苗的效价均符合标准.结论 C28株S基因在传代及保存过程中具有较高的稳定性,对当前疾病流行株有较好的防病效果.
