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利用Red重组系统敲除鲍曼不动杆菌asaA基因
目的 利用Red重组系统敲除鲍曼不动杆菌ATCC 17978的asaA.方法 设计上下游引物中包含asaA的同源序列,并以pKD4质粒为模板,扩增含有卡那霉素抗性基因的DNA片段.将该片段转化于表达重组酶的17978感受态细胞中,在卡那霉素筛选压力下,得到经两次同源双交换的具有卡那霉素基因标记的突变菌株.随后,在重组酶的作用下将抗性基因去除,终得到无抗性基因标记的突变菌株ΔasaA.结果 通过该重组系统,首先将卡那霉素抗性基因的DNA片段替换了基因组中asaA的DNA片段,然后将卡那霉素抗性基因的DNA片段消除,终获得了asaA缺失的突变体.结论 通过Red重组系统为鲍曼不动杆菌中其他基因的缺失突变提供方法与思路.
