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cxcr2基因修饰小鼠骨髓间充质干细胞的构建与鉴定
目的 构建小鼠CXC型趋化因子受体2(CXCR2)基因cxcr2过表达的骨髓间充质干细胞(Bone marrow mes-enchymal stem cell,BMSC)并进行鉴定.方法 全骨髓贴壁法分离培养小鼠BMSC,采用流式细胞术检测干细胞抗原1(stem cell antigen-1,SCA-1)、CD44、CD43、CD45、IA/IE表达率,并诱导成骨分化.以含有小鼠cxcr2的质粒为模版进行PCR扩增,将获得的cxcr2克隆到慢病毒载体,命名为pLenti-cxcr2-GZ;将其与慢病毒包装质粒共转染HEK-293T细胞,收获慢病毒后,通过离心法感染BMSC,经过1μg/mL zeocin压力选择建立了稳定表达CXCR2的小鼠BMSC(CXCR2-BMSC).采用流式细胞术和RT-PCR分别检测其CXCR2蛋白和mRNA表达水平,Transwell趋化实验检测其迁移能力.结果 90％以上的第3代BMSC表达CD44、SCA-1,几乎不表达IA/IE、CD34、CD45,且成功诱导成骨分化.菌液PCR、质粒双酶切后,琼脂糖凝胶电泳鉴定结果得到特异、大小正确的条带及测序鉴定正确,表明成功构建了pLenti-cxcr2-GZ表达质粒.流式细胞术和RT-PCR结果显示,CXCR2-BMSC的CXCR2蛋白和mRNA表达水平均明显高于对照组BMSC,差异有统计学意义(P<0.001).Transwell结果显示,CXCR2-BMSC迁移能力高于对照组BMSC,差异有统计学意义(P<0.01).结论 利用慢病毒系统成功构建了稳定表达CXCR2的BM-SC,cxcr2基因修饰BMSC后可明显增加BMSC的迁移能力.
关键词： CXC型趋化因子受体2 小鼠 骨髓间充质干细胞 细胞迁移
