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慢病毒感染稳定过表达A2bAR基因的大鼠少突胶质前体细胞系的建立
目的:旨在构建稳定高表达腺苷受体A2b (adenosine recepbor A2b,A2bAR)的SD大鼠少突胶质前体细胞体系(oligodendrocyte precursor cells,OPC),用于进一步探讨OPC上A2bAR的相关功能.方法:取对数生长期的大鼠OPC,用携带A2bAR基因的慢病毒进行感染,嘌呤霉素进行筛选纯化,依照慢病毒载体中的荧光标签蛋白,通过荧光显微镜和Western Blot检测OPC上A2bAR的表达.结果:慢病毒感染后,具有绿色荧光的OPC细胞比例不足5％,在给予嘌呤霉素连续处理6d后,具有荧光标记的OPC比例趋于稳定,去除嘌呤霉素的干预后,细胞增殖明显,经传代培养,具有荧光标记的OPC比例高于80％,Western Blot结果显示A2bAR的表达明显上调.获得较高纯度的携带A2bAR高表达基因的OPC,可以冻存、复苏以及传代.结论:采用携带A2bAR基因的慢病毒载体,可以成功感染SD大鼠OPC,构建高表达A2bAR的OPC体系,为A2bAR在髓鞘发育与修复等方面的研究奠定基础.
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低氧条件下PSB603干预对少突胶质前体细胞增殖和分化的影响
目的:探讨在低氧条件下,腺苷受体A2b(A2bAR)拮抗剂PSB603对少突胶质前体细胞(OPC)增殖和分化的影响.方法:剥离新生2dSD大鼠的脑皮层,并原代培养其OPC,随机分为对照组、PSB603组、2％ O2组和实验组,实验组在2％O2干预的基础上再给予PSB603处理,4d后用BrdU掺入技术和免疫细胞化学方法检测BrdU阳性细胞百分数和CNPase阳性细胞百分数的变化,并用qRT-PCR技术检测各组细胞P21cip1、P27kip1 mR-NA含量的变化.结果:与对照组相比较,2％ O2组的BrdU阳性细胞百分数显著上升(P＜0.01),P21、P27 mRNA含量均显著下调(P＜0.01),各组间CNPase阳性细胞百分数无明显变化;实验组与2％O2组间各实验差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:低氧短时间干预能够促进OPC细胞的增殖,P21cip1和P27kip1参与其调控,A2bAR未改变低氧所诱导的OPC增殖.
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低氧条件下PSB603干预后少突胶质前体细胞的改变
目的:探讨在低氧条件下,经腺苷受体A2b(A2bAR)拮抗剂PSB603干预后少突胶质前体细胞(OPC)的改变.方法:原代培养新生SD大鼠脑皮层OPC,随机分为对照组、低氧组、PSB603组及实验组,实验组在2％低氧条件下再给予PSB603处理,4d后用倒置相差显微镜观察各组细胞的形态学差异,并用MTS检测各组细胞吸光值的差异.结果:与对照组比较,PSB603组的吸光值和形态均无明显差异,而低氧组的吸光值明显升高,且具有多分支或网状的细胞明显增多;与低氧组比较,实验组的吸光值明显下降(P＜0.01),且具有多分支或网状的细胞明显减少.结论:低氧能够加速OPC的分化,PSB603能部分阻断低氧所诱导OPC的分化,提示A2bAR在低氧所诱导的OPC分化过程中发挥着重要的作用.这将对治疗脱髓鞘相关疾病以及进一步认识A2bAR在神经系统疾病中的作用具有重要意义.
