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常规反转录酶-聚合酶链锁反应文献资料
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人偏肺病毒基因芯片检测方法的建立及初步应用
目的 建立深圳地区人偏肺病毒(human metapneumovirus,hMPV)核苷酸的快速、特异和敏感的基因芯片检测方法,为 hMPV检测和诊断提供有效的诊疗手段.方法 针对 hMPV 病毒高度保守区域基因序列,应用引物设计软件Primer5设计 hMPV的荧光PCR引物;应用探针设计软件 Array Designer4.20设计 hMPV的寡核苷酸检测探针,将寡核苷酸探针点样至醛基玻片上制备 hMPV基因芯片,并与常规反转录酶-聚合酶链锁反应(RT-PCR)平行比较,对其灵敏度、特异度和重复性,以及用于临床样本的适用性等进行评价.结果 hMPV基因芯片法检测 hMPV的特异度为96.23%(230/239),灵敏度可达2.0×101个/μl,线性范围为2.0×101~2.0×107个/μl,且重复性好;初步检测深圳地区300份临床鼻咽拭子标本,基因芯片法检出率为20.3%(61/300),明显高于常规 RT-PCR法的9.7%(29/300),两方法检测的灵敏度之间差异有统计学意义(χ2=39.205,P<0.05);两种方法检测结果一致性一般(kappa=0.3607).结论 建立了hMPV基因芯片检测法,基因芯片法检测hMPV具有很高的特异度和灵敏度,且检测线性范围广,为实验室开展hMPV的流行监测和早期诊断提供了新的检测技术.
关键词： 人偏肺病毒 基因芯片 常规反转录酶-聚合酶链锁反应 建立 应用
