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人肌红蛋白文献资料
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抗人肌红蛋白单克隆抗体的制备及应用
目的 制备高效价、高特异性的抗人肌红蛋白(MYO)单克隆抗体(mAb),建立ELISA双抗体夹心法检测人血清中MYO.方法 用天然的MYO进行免疫,用杂交瘤技术获得稳定分泌抗人MYO mAb的细胞株;制备腹水型mAb,经亲和纯化后进行抗体特性鉴定;确定佳配对组合并建立双抗体夹心ELISA一步法,对血清样本进行检测,并与进口试剂盒进行比较.结果 共筛选出9株能稳定分泌mAb的细胞株,其中2M1、3M4、5M7、10M4亲和纯化后效价达到(1.0～2.6) ×106(A.约为1.0时的抗体稀释倍数).抗体配对共筛选出3对能进行夹心配对的抗体(2M1/HRP-3M4、5M7/HRP-3M4、10M4/HRP-5M7),其中5M7/HRP-3M4这个配对有较高的灵敏度和较大的线性范围;利用佳配对组合5M7/HRP-3M4建立标准曲线,其线性范围为(25 ～ 1000) ng/mL,优于进口试剂盒的线性范围(25 ～ 500) ng/mL;样本检测结果显示,自制试剂盒的阳性检出率为95％(19/20),阴性检出率为100％ (40/40).结论 获得了2株高特异性,高亲和力的抗人MYO mAb,建立了双抗体夹心ELISA一步法,为ELISA试剂盒的研制奠定了基础.
关键词： 人肌红蛋白 细胞融合 单克隆抗体 ELISA双抗体夹心法
