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伴侣蛋白DnaK文献资料
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志贺菌福氏5a M90T热休克蛋白70(DnaK)多克隆抗体的制备和鉴定
目的 制备小鼠抗志贺菌福氏5a M90T热休克蛋白70 (DnaK)的多克隆抗体,并鉴定其特异性和效价.方法 PCR扩增M90T中的基因dnaK插入到原核表达载体pET-24a中,获得pET24a-dnaK重组质粒,然后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中表达,通过亲和柱纯化融合蛋白DnaK-His.将纯化的融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,采集抗血清.用免疫印迹法、ELISA和免疫荧光技术鉴定抗血清的特异性和效价.结果 重组质粒pET24a-dnaK在大肠杆菌BL21(DE3)中可以高效表达.用纯化的融合蛋白DnaK-His免疫小鼠制备得到的多克隆抗体能特异性低检测志贺菌福氏5a M90T DnaK蛋白,能有效地用于免疫印迹法、ELISA和免疫荧光等试验.结论 成功制备了抗志贺菌福氏5a M90T DnaK蛋白的小鼠多克隆抗体.
