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hTERT基因核心启动子文献资料
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hTERT基因核心启动子调控的TRAIL基因表达载体的构建及对卵巢癌细胞凋亡的影响
目的: 构建了人端粒酶逆转录酶(human telomerase reserse transcription, hTERT)基因核心启动子调控的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apop tosis inducing ligand, TRAIL)基因真核表达载体并观察其对卵巢癌细胞凋亡的诱导作用.方法: 从人胎盘中提取总RNA, 利用RT-PCR技术扩增了TRAIL基因片段.测序正确后, 利用基因重组方法将TRAIL基因克隆入带有hTERT 基因核心启动子pIRES2-EGFP真核表达载体中.获得由hTERT基因核心启动子调控的绿色荧光蛋白和带有效应型TRAIL基因的真核表达载体hTERTpromoter-pIRES2-EGFP-TRAIL.用脂质体转染法, 将其转染卵巢癌细胞系SKOV3细胞中, 应用RT-PCR法检测转染前后卵巢癌细胞中外源基因的表达情况, 以流式细胞术检测TRAIL对卵巢癌细胞的细胞周期的影响及诱导凋亡的作用.结果: 经酶切鉴定及测序结果证实, 所构建的重组载体正确.转染hTERT promoter-pIRES2-EGFP-TRAIL载体后, SKOV3细胞的增殖受到抑制, 出现明显凋亡.结论: hTERT基因核心启动子在卵巢癌细胞中可特异性地调控其下游TRAIL基因的表达, 并发挥其促凋亡作用.构建由hTERT基因核心启动子调控的表达载体, 可能是一种新型和有希望的肿瘤治疗的途径.
关键词： hTERT基因核心启动子 TRAIL基因 表达载体 卵巢癌细胞 凋亡
