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单链抗体c片段(scFv-Fc)文献资料
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全人源抗IL-33scFv-IgG1Fc融合蛋白在CHO k1细胞中稳定高表达
目的 利用两种不同真核表达载体构建全人源抗白细胞介素33单链抗体c片段(IL-33 scFv-Fc)重组载体,转染中国仓鼠卵巢(CHO) k1细胞,筛选稳定高表达单细胞株以提高融合蛋白产量.方法 双酶切前期构建的重组质粒pcDNA3.1/SP-scFv-Fc,回收SP-scFv-Fc片段,插入载体PMH3EN中,构建PMH3EN/SP-scFv-Fc重组载体并与重组质粒pcDNA3.1/SP-scFv-Fc分别转染CHO k1细胞;反转录PCR、Western blot法检测目的基因scFv-Fc的转录及表达;Dot blot法筛选稳定高表达细胞株;ELISA检测scFv-Fc的水平及生物学活性.结果 重组质粒测序结果表明成功构建了真核表达载体PMH3 EN/SP-scFv-Fc,插入目的基因SP-scFv-Fc大小为1560 bp左右.反转录PCR检测重组质粒表达情况显示两组重组质粒的目的基因在CHO k1细胞中均成功转录.scFv-Fc不仅可分泌到细胞培养基中,还可与人IL-33以及抗人IgG1 Fc特异性结合.重组载体PMH3EN/SP-scFv-Fc组融合蛋白表达水平相对较高.经过4轮筛选,选出了稳定高表达细胞株,初步测其scFv-Fc表达产量为10 mg/L;竞争ELISA检测结果显示scFv-Fc可显著抑制IL-33与其受体ST2的结合.结论 在CHO k1细胞成功高表达IL-33 scFv-Fc.
