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深低温停循环手术早期核因子κB磷酸化增强并上调生长阻滞和DNA损伤基因45β(GADD45β)表达
目的 研究深低温停循环(DHCA)术后早期海马神经元细胞内核因子κB(NF-κB)的表达变化及其分子水平调控.方法 本研究通过建立DHCA和脑缺血再灌注损伤(CRI)大鼠模型,分别获得不同模型建立后0、6、12、24、48 h的大鼠海马组织样本,其中CRI组作为DHCA组损伤对照.采用实时定量PCR检测DHCA术后48 h内,NF-κB、生长阻滞和DNA损伤基因45β(GADD45β)的mRNA水平,Western blot法检测NF-κB、GADD45β的蛋白水平.使用荧光素酶报告基因法检测体外使用氧糖缺乏条件处理小鼠海马神经元HT-22细胞后,GADD45β表达与NF-κB表达以及磷酸化之间的关系.结果 CRI模型组24 h内NF-κB mRNA水平逐渐升高,至24h达到峰值,随后下降.然而,DHCA模型组12 h内NF-κB mRNA水平变化不显著,至术后24h时,升高至正常的2倍,随后逐渐降低.CRI和DHCA组中GADD45β的mRNA水平均逐渐升高,其中CRI组的变化更为显著,而DHCA组内GADD45β的mRNA水平仅为术后0h对照组的2倍.CRI组织中NF-κB以及NF-κB磷酸化水平均显著升高,DHCA模型组NF-κB以及NF-κB磷酸化水平与正常对照组无显著性变化,而与CRI组相比显著降低.Western blot 结果显示CRI组中GADD45β的蛋白水平在术后24h内上升,DHCA组中GADD45β的蛋白水平在12 h时高,24h时与对照组相比无统计学意义.荧光素酶报告基因法证实抑制HT-22细胞NF-κB的活化,可降低GADD45β的水平.结论 脑组织缺血再灌注过程中NF-κB磷酸化增强并增加GADD45β水平.
