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CD2O文献资料
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可溶性CD20在HEK293T细胞中的高效表达
目的 构建CD20真核表达载体,在HEK293T细胞中高效表达CD20蛋白.方法 以人外周血单个核细胞(PBMC)总RNA为模板,反转录PCR扩增得到CD20基因,并插入真核表达载体pCMV3-C-His,PCR初步验证后,再测序验证.将重组质粒瞬时转染HEK293T细胞进行蛋白表达,ELISA、Western blot法检测CD20蛋白表达,优化表达条件.结果 PCR与测序均显示成功插入CD20基因.转染HEK293T细胞72 h后,Western blot法检测到细胞内和细胞培养上清液中的CD20蛋白.HEK293T细胞传代次数与细胞培养上清液中CD20表达量相关.结论 成功构建CD20真核表达载体,高效表达CD20可溶性蛋白.
