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自发永生化人角膜上皮细胞文献资料
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HIF-1α的RNA干涉可引起缺氧条件下人角膜上皮细胞VEGF表达下调和PEDF表达上调
目的 探讨shRNA干扰HIF-1α表达对缺氧条件下人角膜上皮细胞(hCEC)血管内皮生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响.方法 针对HIF-1α mRNA序列靶点设计及合成3个小发夹RNA(shRNA),分别在体外转染自发永生化人角膜上皮细胞(S-ihCEC),转染后的S-ihCEC在1 mmol/L CoCl2中缺氧诱导培养6h,实时定量PCR检测HIF-1α、VEGF、PEDF的mRNA表达,Western blot法检测HIF-1α、VEGF的蛋白表达,ELISA检测PEDF的水平.结果 与缺氧组比较,转染HIF-1α shRNA的S-ihCEC中HIF-1α mRNA表达下调、HIF-1α蛋白表达下调,VEGFmRNA表达下调、VEGF蛋白表达下调,PEDF mRNA表达上调(1.22 ±0.18)倍,PEDF水平升高.结论针对HIF-1α的shRNA能有效干扰S-ihCEC中HIF-1α的表达,并下调VEGF表达、上调PEDF的表达.