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信号转导子与转录激活子3短发夹RNA(STAT3 shRNA)文献资料
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敲低肝癌细胞STAT3抑制IFN1诱导的HepG2肝癌细胞增殖和迁移
目的 筛选并制备信号转导子与转录激活子3短发夹RNA(STAT3 shRNA)慢病毒,感染HepG2肝癌细胞抑制其STAT3表达,观察对1型干扰素(IFN1)诱导的肝癌细胞增殖和迁移的影响及机制.方法 设计并合成4段人STAT3基因的干扰序列(STAT3 shRNA 1～STAT3 shRNA 4)以及对照序列(Ctrl shRNA),与pLKO.1-sp6-pgk-GFP连接构建慢病毒表达载体,随后与骨架质粒psPAX2、pMD2.G共转染HEK293T细胞制备慢病毒并感染HepG2细胞.Western blot法检测STAT3的蛋白水平,筛选有效序列.敲低STAT3水平后,CCK-8法检测HepG2细胞的增殖,TranswellTM迁移和划痕实验检测HepG2细胞的迁移.同时观察2000 U/mL重组人IFNα2b诱导的肝癌细胞增殖、迁移能力的变化,Western blot法检测IFN相关STAT1信号的磷酸化水平.结果 筛选对STAT3敲低效果显著的STAT3 shRNA1和STAT3 shRNA2,敲低STAT3水平后,肝癌细胞增殖和迁移降低.2000 U/mL IFNα2b对细胞的增殖抑制作用更显著,迁移细胞的数量显著下降.敲低STAT3水平后,肝癌细胞STAT1的磷酸化水平升高,在IFNα2b处理后STAT1磷酸化水平进一步升高.结论 敲低肝癌细胞STAT3通过上调STAT1信号通路活化,抑制细胞的迁移、增殖,恢复IFN在肝癌细胞中的应答.
