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迁移和侵袭抑制蛋白(MIIP)文献资料
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迁移和侵袭抑制蛋白(MIIP)荧光素酶报告基因稳定共表达HCT116MIIP-Luc结肠癌细胞系的建立
目的 建立迁移和侵袭抑制蛋白(MIIP)荧光素酶报告基因稳定过表达的结肠癌HCT116细胞系,为MIIP基因的在体功能研究提供细胞模型.方法 将MIIP基因插入慢病毒载体pLEX-MCS-HA中获得重组慢病毒载体pLEX-MCS-HA-MIIP.利用该重组载体pLEX-MCS-HA-MIIP及包装载体VSVG、△8.9,共转染HEK293T细胞,包装表达MIIP的慢病毒,将其感染HCT116细胞后,采用适宜浓度的嘌呤霉素筛选,建立MIIP稳定过表达的HCT116细胞.利用表达荧光素酶报告基因的慢病毒进行二次感染,建立MIIP和荧光素酶报告基因稳定共表达的HCT116 MIIP-Luc细胞和仅表达荧光素酶报告基因的HCT116Luc细胞.利用实时荧光定量PCR检测MIIP的mRNA水平,Westem blot法检测MIIP蛋白水平,小动物活体成像技术观察HCT116MIIP-Luc细胞和HCT116Luc细胞的荧光强弱.结果 成功建立了MIIP荧光素酶报告基因稳定共表达的HCT116MIIP-Luc细胞和仅表达荧光素酶报告基因的HCT116Luc细胞,在HCT116MIIP-Luc细胞中实现了MIIP过表达,生物发光成像结果显示HCT116MIIP-Luc细胞和HCT116Luc细胞均可产生较强的荧光.结论 分别建立了可传代的MIIP过表达及荧光素酶报告基因稳定共表达的结肠癌HCT116细胞株.
关键词： 结肠癌 迁移和侵袭抑制蛋白(MIIP) 荧光素酶报告基因 慢病毒感染
