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sKDR真核克隆表达及其对血管内皮细胞增殖的影响
研究获取可溶性血管内皮生长因子受体2(sKDR)基因构建sKDR的真核表达载体,观察sKDR对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖的影响.方法提取HUVECs总RNA,利用RT - PCR方法扩增KDR胞外免疫球蛋白1-3区基因片段,将其插入真核表达质粒pcDNA3.1中,测序鉴定基因序列正确后,用脂质体法将重组质粒pcDNA3.1 - sKDR转染Lewis肺癌细胞；采用RT -PCR和SDS - PAGE方法检测sKDR在基因和蛋白水平上的表达情况；将转染重组质粒的细胞上清液加至血管内皮生长因子(VEGF)诱导的HUVECs培养基中,采用MTT法检测转染细胞上清液对VEGF诱导的HUVECs增殖的影响.结果经酶切鉴定及基因测序证实成功获得了重组质粒pcDNA3.1 - sKDR;重组质粒成功转染Lewis肺癌细胞,经RT - PCR和SDS - PAGE方法证实sKDR在基因和蛋白水平上均获得了成功表达；转染的含sKDR的Lewis肺癌细胞上清液可明显抑制VEGF诱导的HUVECs增殖.结论成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1 - sKDR,sKDR在真核系统中获得了有效表达,且表达的蛋白对VEGF诱导的血管内皮细胞增殖有明显抑制作用.
关键词： 可溶性血管内皮生长因子受体2 抗血管生成 真核表达 内皮细胞 血管内皮生长因子 -
肾综合征出血热外周静脉血细胞因子的变化与病情的关系
目的 观察肾综合征出血热(HFRS)患者各病期外周静脉血血管内皮生长因子(VEGF)、可溶性血管内皮生长因子受体2(sVEGFR2)、血管生成素-1(ANG1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-y)水平的变化及其变化与病程中血管渗漏的关系,为研究HFRS的发病机制提供依据.方法 用酶联免疫吸附法(ELISA)检测了68例不同病期HFRS患者外周静脉血上述5种细胞因子,并以20例健康志愿者作为正常对照.同时对20例HFRS患者病程5期连续动态收集的外周静脉血标本中的VEGF进行了测定.结果 在所有观察患者中,血浆VEGF水平从发热期开始增高[(337.6±238.0)ng/L],休克期达到峰值[(556.0±185.2)ng/L],少尿期开始迅速下降[(259.0±152.8)ng/L],在多尿期[(223.1±110.6)ng/L]和恢复期[(246.5±202.0)ng/L]回落到正常水平.HFRS患者sVEGFR2、ANG-1水平在休克、少尿、多尿期均低于健康对照组；TNF-α和IFN-γ水平在发热期、低血压休克期、少尿期和多尿期均高于健康对照组,其中大多数与后者比较差异有统计学意义.此外,对20例各病期连续动态采集的血样进行验证检测表明,VEGF在休克期表达确实明显升高[(561.1±194.3)ng/L],与其他各期(212.5～397.5 ng/L)比较差异均有统计学意义.结论 HFRS患者血管通透性增高可能与休克期VEGF高表达有关,sVEGFR2、ANG-1、TNF-α、INF-γ表达量的变化可能在VEGF介导的血管通透性增高中发挥协同作用.
